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*檢測試劑盒

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產品型號CFC030D

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更新時間：2016-03-17 02:00:59瀏覽次數：398次

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蘇州艾瑞德生物科技有限公司

經營模式：生產廠家

商鋪產品：66條

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產品簡介

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物*與微孔條上預包被的偶聯抗原競爭其抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含*的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出殘留物*的含量。

詳細介紹

【試劑盒技術指標】
規      格：96孔/盒
靈敏度： 1ppb
檢測時間： 80min
樣本檢測下限：
雞肉 / 肝、豬肉 / 肝、雞蛋、蜂蜜 ……………… 1 p pb
血清、尿液…………………………………………4ppb
牛          奶 ………………………………………… 2 0 ppb
樣本回收率
雞肉/ 肝、豬肉 / 肝…………………………90% ±10%
雞        蛋   ……………………………………65% ±10%
蜂蜜、牛奶、血清 …………………………70% ±10%
試劑盒組成
1、微量測試孔：每條8孔，一板12條
2、標準液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、 1ppb、3ppb、9ppb、 27ppb、 81ppb
3、酶標記物   7ml ……………………………… 紅色帽
4、抗體工作液 10ml …………………………… 藍色帽
5、底物A液    7ml ………………………………白色帽
6、底物B液　7 ml………………………………黑色帽
7、終止液        7 ml ………………………………黃色帽
8、20X濃縮洗滌液40 ml………………………白色帽
     2X濃縮復溶液 50 ml……………透明帽
【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標儀、打印機、均質器、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl
試       劑：乙酸乙酯、NaH2PO4•2H2O、Na2HPO4•12H2O、正己烷
【樣本前處理步驟】
樣本前處理須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（b）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
樣本處理前需配制：
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（b）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時對實驗器具進行清潔，避免污染干擾實驗結果。
樣本前處理需配制：
配液1、0.02MPB緩沖液
            稱取2.58g Na2HPO4•12H2O和0.44g NaH2PO4•2H2O加去離子水500ml溶解。
配液2、樣本復溶液：
           將2×濃縮復溶液用去離子水以1：1稀（1份濃縮復溶液+1份去離子水），用于樣本提取后的復溶。
（a ）動物組織（肌肉、肝臟等）、雞蛋、蝦、魚等
1、稱取2±0.05g組織樣本于離心管中，加入6ml乙酸乙酯，充分混勻5min，于15℃，4000r/min以上速度離心10min；
2、移取3ml上清液至干凈的玻璃管中，于50℃氮氣或空氣吹干；
3、加入已稀釋好的復溶液1ml混勻，再用正己烷1ml混合30s。室溫4000r/min，離心5min，除去上層液；
4、取20µl下層用于分析。
      樣本稀釋倍數：1
注：在使用國家規定zui高殘留*（100ppb）進行判定時，需進行5倍稀釋（1份樣本液+4份已稀釋好的復溶液）。
4、取20µl下層用于分析。
樣本稀釋倍數：1倍
注：在使用國家規定zui高殘留*（100ppb）進行判定時，需進行5倍稀釋（1份樣本液+4份已稀釋好的復溶液）。
（b）血清樣本
1、將血樣本于室溫放置30min，于10℃，4000r/min以上離心10min，分離出血清或過濾血清；
2、取1ml血清，加入3ml 0.02 M PB緩沖液混合，混合30s；
3、取20µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數：4倍　　
（c）蜂蜜
1、稱取1±0.05g蜂蜜樣本于50ml離心管中，加入2ml 0.02MPB緩沖液溶解；
2、加入8ml乙酸乙脂振蕩5min，4000r/min以上室溫離心10min；
3、取4ml上層液體于50℃下氮氣吹干，加0.5ml 已稀釋好的復溶液復溶，混合30s；
4、取20µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數：1倍
（d）尿液
1、用3ml0.02 M PB緩沖液與1ml經離心后的清亮尿樣本混合，混合30s；
2、取20µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數：4倍　　　
（e）牛奶
1、取1ml牛奶樣本用0.02 M PB緩沖液按1︰19（v/v）稀釋（即20µl牛奶+380µl 0.02 M PB緩沖液），混合30s；
2、取20µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數：20倍
【酶標免疫分析程序】
測定前應須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2-8℃環境。
3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的*性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、加標準品/樣本20µl /孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50μl/孔，再加入80µl /孔的抗體工作液，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環境中反應60min 。
6、取出酶標板甩出孔內液體后用洗滌液按每孔250µl，洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、顯色：每孔加入A液50µl，再加B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環境中避光顯色20min。
8、測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測,在5min內讀完數據），測定吸光度值（OD值）。
【結果判定】
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與磺胺類藥物的含量成負相關。
1、粗略判定
      用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍（ng /ml）。假設樣本1的吸光度值0.211，樣本2的吸光度值為0.785，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.140；1ppb為1.560；3ppb為1.124；9ppb為0.650； 27ppb為0.328；81ppb為0.125。則樣本1的濃度范圍是27ppb-81ppb；樣本2的濃度范圍是3ppb-9ppb。乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中*實際含量。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標準（0標準）的吸光度值，再乘以*，即：
百分吸光度值（%）＝ B ×*

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以*濃度（ng /ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中*實際含量。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（索取）
3、標準曲線：
B/B0 （%）

       1            3           9            27            81
                      （ppb） [µg/kg]
     圖1：*檢測試劑盒的回歸曲線

4、再現性：
    %CV

         0        1        3       9       27       81
                          （ppb） [µg/kg]
        圖2：*檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結果確定了精密度，圖2顯示出的精密度情況，獲得的標準吸收值的變異系數（%CV）對相應*濃度作曲線，可以看到在全部范圍內變異系數如此之低，可以得到很好的再現性。
【注意事項】
1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會伴隨著出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、混合要均勻，否則會出現重復性不好的現象。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm<0.5 ）時，表示試劑可能變質。
8、該試劑盒*反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
【儲存】
原包裝應儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產日期、有效期、生產批號見外包裝。