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上海閃晶分子生物科技有限公司
上海閃晶分子生物科技有限公司
步驟1. 目標基因全基因合成：
從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。如果我們的cDNA文庫中有這個基因，我們免費提供給客戶。
根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子優化，密碼子優化。
合成設計好的基因序列。
步驟1. 目標基因全基因合成：
從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。如果我們的cDNA文庫中有這個基因，我們免費提供給客戶。
根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子優化，密碼子優化。
合成設計好的基因序列。
提供給客戶：目標基因（在T載體或常規穿梭載體上）及測序報告。
價格：3.80元/堿基,如果客戶直接提供構建好的質粒，則免去這部分費用．
時間：2~3周，根據基因的大小而定.詳見全基因合成服務
步驟2. 目標基因亞克隆：
擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
測序驗證構建質粒的準確性。
閃晶生物免費提供如下表達載體：
提供給客戶：正確構建的重組表達質粒，含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。
價格：免費
時間：1-2周
步驟3. E. coli表達菌株轉化及篩選：
擴增并抽提構建好的表達質粒。
將表達質粒轉化到高效的E.Coli表達菌株中。
至少挑選5個陽性克隆于LB培養基中擴增并誘導表達目標蛋白。
SDS-PAGE電泳檢測培養后中目標蛋白的表達情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
可提供表達菌株：DH5α, , JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
提供給客戶：重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。
價格：免費
時間：1周
步驟4. 目標蛋白表達及純化：
搖瓶培養1L重組細菌，誘導表達目標蛋白。
通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
利用蛋白酶去除不需要的純化標簽，再純化獲得所需的目標蛋白（可選，構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點）。
通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
提供給客戶：純化好的目標蛋白1~5mg及純化報告。
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