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CytoFLEX流式細(xì)胞儀平臺(tái)

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技術(shù)原理流式細(xì)胞技術(shù)（FlowCytometry

詳細(xì)介紹

技術(shù)原理

流式細(xì)胞技術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）

流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）是一種對(duì)液流中排成單列的細(xì)胞或其它生物微粒（如微球、細(xì)菌、小型模式生物等）逐個(gè)進(jìn)行快速定量分析和分選的技術(shù)，即在流動(dòng)的狀態(tài)中檢測(cè)細(xì)胞或顆粒的各項(xiàng)特性，具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，速度快，并能實(shí)現(xiàn)多參數(shù)分析的特點(diǎn)。

常規(guī)分析型流式細(xì)胞儀原理圖

CytoFLEX系列流式細(xì)胞儀，擯棄傳統(tǒng)光電倍增管（PMT），采用固體、高效、低噪音光纖二極管陣列檢測(cè)器（FAPD）設(shè)計(jì)而成的波分復(fù)用（WDM）檢測(cè)模塊，大幅提升儀器的靈敏度，使對(duì)稀有細(xì)胞和微顆粒的檢測(cè)水平有了質(zhì)的飛躍。

產(chǎn)品應(yīng)用/特點(diǎn)

·創(chuàng)新性設(shè)計(jì)，助推細(xì)胞研究 CytoFLEX平臺(tái) 桌面型流式細(xì)胞儀系列，采用創(chuàng)新性的設(shè)計(jì)，將光學(xué)部件與流動(dòng)室進(jìn)行整合，限度降低光損失，帶來(lái)的激發(fā)與發(fā)射性能，實(shí)現(xiàn)更高信號(hào)分辨率下更為準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)采集。 CytoFLEX系列將持之以恒地充分發(fā)揮下列功能： ·的靈敏度 ·采用臺(tái)式分析儀實(shí)現(xiàn)微小粒子分析 ·可擴(kuò)展的插拔式帶通濾光片套件 ·擴(kuò)展性強(qiáng)，升級(jí)靈活 ·軟件直觀，便于多色分析
CytoFLEX系列可輕松完成實(shí)驗(yàn)： ·活力檢測(cè) ·細(xì)胞增殖 ·細(xì)胞周期分析 ·細(xì)胞凋亡 ·DNA分析 ·細(xì)菌、酵母和藻類(lèi)分析 ·細(xì)胞計(jì)數(shù)
·專(zhuān)注科研，按實(shí)驗(yàn)需求配置系統(tǒng) CytoFLEX流式細(xì)胞儀系列，提供易于使用的系統(tǒng)和完備的性能，使用戶(hù)專(zhuān)注于科研本身，省去對(duì)于儀器及軟件操作的培訓(xùn)過(guò)程。用戶(hù)可以按照實(shí)驗(yàn)室需求配置系統(tǒng)，無(wú)論是復(fù)雜程度低或高的常規(guī)分析，還是推動(dòng)流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展的前沿實(shí)驗(yàn)，都可以在該系統(tǒng)上開(kāi)展。

例：以13色免疫表型分析法分析人外周血中的T細(xì)胞亞群
（實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基于細(xì)胞表面分子差異表達(dá)的分析方法，利用多個(gè)標(biāo)記來(lái)捕捉不同的T細(xì)胞亞群。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，使用紅外激光通道可添加死活細(xì)胞分析，解放出其他通道，用于典型的細(xì)胞表面標(biāo)記物分析；同時(shí)，紅外激光通道可以降低相對(duì)明亮的CD8標(biāo)記物的補(bǔ)償需求，保持對(duì)弱陽(yáng)性結(jié)果檢測(cè)的靈敏度。）
·波分復(fù)用與集成光路，打造高靈敏度性能 CytoFLEX 平臺(tái)系列產(chǎn)品，借助電信行業(yè)技術(shù)，采用波分復(fù)用（WDM）檢測(cè)模塊，依靠光纖和帶通濾光片，將多種波長(zhǎng)的光信號(hào)分開(kāi)進(jìn)行測(cè)量，無(wú)需使用多個(gè)二向色濾光片引導(dǎo)光路，與傳統(tǒng)儀器相比，更容易配置熒光通道，且能夠在上減少折射而提高光效率。此外，系統(tǒng)使用集成式光學(xué)系統(tǒng)，將光源聚焦到流動(dòng)池上，實(shí)現(xiàn)高效的光路管理，獲得對(duì)于熒光標(biāo)記細(xì)胞的激發(fā)和發(fā)射效果，數(shù)據(jù)可呈現(xiàn)出對(duì)弱陽(yáng)性信號(hào)的強(qiáng)大鑒別，以及陰性和陽(yáng)性信號(hào)的精準(zhǔn)區(qū)分。

例：SPHEROTM 8峰彩虹校準(zhǔn)微球檢測(cè)結(jié)果
（上：藍(lán)光通道；中：紅光通道；下：紫光通道。由八峰彩虹微球在CytoFLEX各個(gè)通道中的檢測(cè)結(jié)果可知，CytoFLEX系列不僅在常用的檢測(cè)通道中有的靈敏度表現(xiàn)，在紫光和遠(yuǎn)紅外通道方面也表現(xiàn)突出。）

例：對(duì)低水平表達(dá)的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的鑒定
（無(wú)需進(jìn)行熒光扣除對(duì)照染色，即可對(duì)稀有的FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞群進(jìn)行測(cè)定）
·紫光側(cè)向散射功能，檢測(cè)可至納米級(jí)別任何粒子所散射的光量與粒子直徑成正比，與用于檢測(cè)它的光波長(zhǎng)成反比。因此，波長(zhǎng)較小的紫光（405nm）和藍(lán)光（488nm）在任何粒徑條件下產(chǎn)生的直角光散射多于其他光；此外，光波進(jìn)入不同折射率的介質(zhì)而被折射時(shí)，折射角與光波長(zhǎng)成反比，波長(zhǎng)越小，折射角越大。根據(jù)上述物理特性，CytoFLEX平臺(tái)配備了觸發(fā)紫光和藍(lán)光側(cè)向角散射光的功能，這種靈活性增大了粒子的檢測(cè)和分析范圍。在微顆粒（如外泌體、微囊泡和二氧化硅納米粒子）的檢測(cè)應(yīng)用中，CytoFLEX產(chǎn)品可展現(xiàn)出強(qiáng)大實(shí)力，其檢測(cè)大小極限可低至200nm。

例：納米微顆粒檢測(cè)
（使用前向散射和側(cè)向散射光參數(shù)分辨不同大小的微球顆粒）
·檢測(cè)線性與智能補(bǔ)償，結(jié)果準(zhǔn)確且可重復(fù) 由于設(shè)備中半導(dǎo)體的生產(chǎn)工藝具有的一致性，使得CytoFLEX平臺(tái)測(cè)得的熒光強(qiáng)度與相應(yīng)的檢測(cè)器增益值具有很好的線性度。由多個(gè)單次增益設(shè)定值獲得的補(bǔ)償矩陣可以相互混合，形成全矩陣，即補(bǔ)償庫(kù)。補(bǔ)償庫(kù)存儲(chǔ)熒光染料的補(bǔ)償矩陣溢出值，建立智能補(bǔ)償庫(kù)，當(dāng)增益值改變，智能補(bǔ)償庫(kù)自動(dòng)調(diào)節(jié)并確定正確的補(bǔ)償矩陣，對(duì)光路進(jìn)行校正，保持儀器穩(wěn)定性，使用戶(hù)輕松獲得準(zhǔn)確和可重復(fù)性的結(jié)果，從容應(yīng)對(duì)多色分析任務(wù)。

例：補(bǔ)償庫(kù)存儲(chǔ)熒光染料的補(bǔ)償矩陣溢出值
·數(shù)據(jù)獲取和分析軟件，輕松上手易學(xué)易用 CytoFLEX平臺(tái)產(chǎn)品配套的CytExpert軟件易學(xué)易用，對(duì)于任何水平的流式使用者——無(wú)論是新手還是經(jīng)驗(yàn)豐富的流式細(xì)胞儀操作者，均能快速掌握和運(yùn)行操作，根據(jù)實(shí)驗(yàn)便捷自如地設(shè)置方案，獲得符合發(fā)表需求的優(yōu)質(zhì)數(shù)據(jù)。

CytExpert特點(diǎn)包括： ·補(bǔ)償實(shí)驗(yàn)配置可在數(shù)據(jù)收集后進(jìn)行修改 ·補(bǔ)償實(shí)驗(yàn)可使用多種樣本類(lèi)型（微球/細(xì)胞） ·線性增益（電壓），對(duì)改變的增益設(shè)置自動(dòng)修改，無(wú)需手動(dòng)調(diào)整補(bǔ)償 ·直觀的GUI手形工具可輕松調(diào)整細(xì)胞儀參數(shù)設(shè)置 ·自動(dòng)設(shè)置閾值、激光間延遲 ·具有動(dòng)態(tài)的坐標(biāo)軸 ·無(wú)微球計(jì)數(shù) ·加載樣本時(shí)可自動(dòng)混合 ·EMF文件格式，具有批量處理功能更新后的CytExpert 2.0 版本增加和完善了如下功能： ·每張疊加圖顯示多達(dá)10個(gè)樣品 ·存儲(chǔ)15個(gè)通道的2500萬(wàn)個(gè)events數(shù)據(jù) ·散點(diǎn)圖顯示多達(dá)50萬(wàn)個(gè)events ·與Win7、Win8或Win10兼容

·板孔進(jìn)樣模式，提高工作效率 CytoFLEX平臺(tái)產(chǎn)品可配備板孔進(jìn)樣器，選擇板孔進(jìn)樣器模式后，進(jìn)樣器系統(tǒng)可在32分鐘內(nèi)完成一塊96孔板的分析，有效節(jié)省時(shí)間，提高工作效率。板孔進(jìn)樣模式的優(yōu)點(diǎn)還包括： ·在5分鐘內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)單管和采樣板獲取之間的切換 ·具有便捷的虛擬板布局，配備自定義清洗和混勻功能 ·可在單板上定義多個(gè)實(shí)驗(yàn) ·與平底、U形底和V形底孔板兼容

耗材

濾光片

購(gòu)置儀器時(shí)，即根據(jù)用戶(hù)需要配備全套濾光片；用戶(hù)后期可根據(jù)需要自行切換，無(wú)需再購(gòu)買(mǎi)額外的濾光片。

產(chǎn)品規(guī)格

·CytoFLEX流式細(xì)胞儀
CytoFLEX可提供傳統(tǒng)的激光調(diào)色板和多個(gè)通道，從單激光四色至三激光十三色，滿(mǎn)足大部分基本的流式細(xì)胞分析需求。

藍(lán)-紅-紫光（B-R-V）系列
CytoFLEX配置的儀器包括五個(gè)488nm（藍(lán)色）熒光通道、三個(gè)638nm（紅色）熒光通道和五個(gè)405nm（紫色）熒光通道。儀器本身包含13個(gè)帶通濾光片，可以根據(jù)需要進(jìn)行配置。用戶(hù)可啟用目前研究所需通道，隨著研究的深入，后續(xù)可增加通道數(shù)量。
帶通濾光片

450/45	585/42	660/10（2）	712/25
525/40（2）	610/20（2）	690/50	780/60（3）

可選配置

激光數(shù)	熒光通道	488NM（藍(lán)光）	638NM（紅光）	405NM（紫光）
3	13	5	3	5
3	12	5	3	4
3	12	4	3	5
3	11	4	3	4
3	11	3	3	5
3	10	4	3	3
3	10	5	3	2
2	10	5		5
3	10	5	3	2
3	9	3	3	3
3	9	4	3	2
2	8	5	3
3	8	3	3	2
3	8	4	2	2
3	7	3	2	2
2	6	3	3
2	6	4	2
2	6	3		3
2	6	4		2
3	6	2	2	2
1	5	5
2	5	3	2
1	4	4
2	4	3	1
2	4	2	2
2	4	2		2

CytoFLEX性能參數(shù)

最小上樣體積	10μL
上樣速度	30,000 events/s
校準(zhǔn)方式	光路自動(dòng)校準(zhǔn)
軟件	CytExpert采樣與分析軟件
動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)顯示范圍	7個(gè)數(shù)量級(jí)
熒光靈敏度	FITC< 30 MESF，PE<10 MESF
信號(hào)收集系統(tǒng)	Clear Focus，可實(shí)現(xiàn)10-7到107的信號(hào)顯示
信號(hào)處理精度	24 Bit
最小微粒檢測(cè)值	200nm
激光器	50mW，全固態(tài)，高功率；非共線激發(fā)；具溫控系統(tǒng)，即開(kāi)即用
升級(jí)空間	可至三激光13色
單樣本信息存儲(chǔ)量	2500萬(wàn)個(gè)events數(shù)據(jù)
體積	40cm3，適配大部分生物安全柜

·CytoFLEX S 流式細(xì)胞儀
CytoFLEX S型號(hào)配置四色激光，擴(kuò)展了熒光染料調(diào)色板，可以滿(mǎn)足用戶(hù)特殊應(yīng)用的需求。

藍(lán)-紅-紫-黃綠光（B-R-V-Y）系列
CytoFLEX S 該款配置的儀器包含兩個(gè)488nm（藍(lán)色）熒光通道、三個(gè)638nm（紅色）熒光通道、四個(gè)405nm（紫色）熒光通道和四個(gè)561nm（黃綠色）熒光通道。
561nm黃色激光激發(fā)RFP及其衍生物（如DsRed、HcRed）的效率優(yōu)于488nm藍(lán)色激光。同時(shí)，激光空間分隔可提高靈敏度，地減少激光之間的補(bǔ)償。因此，該款儀器可用于分析表達(dá)GFP、YFP、DsRed和HcRed的細(xì)胞，以高分辨率獲得同時(shí)表達(dá)的多色熒光蛋白信號(hào)。
儀器本身包含13個(gè)帶通濾光片，可以根據(jù)需要進(jìn)行配置。用戶(hù)可啟用目前研究所需通道，隨著研究的深入，后續(xù)可增加通道數(shù)量。
包括13個(gè)可復(fù)位的帶通濾光片

450/45	585/42	660/10（2）	712/25
525/40（2）	610/20（2）	690/50（2）	780/60（2）

可選配置

激光數(shù)	熒光通道	488NM（藍(lán)光）	638NM（紅光）	405NM（紫光）	561NM（黃綠光）
4	13	2	3	4	4
3	10	2		4	4
3	9	2	3		4
4	9	2	2	2	3
3	9	2	3	4
2	6	2			4
3	6	2		2	2

藍(lán)-紅-紫-近紫外光（B-R-V-N）系列
CytoFLEX S 375 nm 激光是 CytoFLEX 系列桌面型流式細(xì)胞儀的新增選項(xiàng)。該款流式細(xì)胞儀可以同時(shí)檢測(cè)15個(gè)參數(shù)，包括13個(gè)熒光參數(shù)。配置儀器包括488nm（藍(lán)）激光：5個(gè)通道；638nm（紅）激光：3個(gè)通道；405nm（紫）激光：3個(gè)通道；375nm（近紫外）激光：2個(gè)通道。該款細(xì)胞儀配備六個(gè)熒光通道，用戶(hù)可在后期升級(jí)至更高參數(shù)配置。
新增的 375 nm 波長(zhǎng)激光，在空間分離光束點(diǎn)中，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì) Hoechst、DAPI 和亮紫外（BUV）染料的出色激發(fā)，確保在無(wú)需使用真正的紫外光的情況下，即可通過(guò)上述染料/熒光染料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，避免相應(yīng)的費(fèi)用，降低研究成本。
包括13個(gè)可復(fù)位的帶通濾光片

450/45（2）	585/42	660/10	690/50	780/60（2）
525/40（2）	610/20（2）	675/30	712/25

可選配置

激光數(shù)	熒光通道	488NM（藍(lán)光）	638NM（紅光）	405NM（紫光）	375NM（近紫外光）
4	13	5	3	3	2
3	10	5	3		2
2	6	4			2

藍(lán)-紅-紫-紅外光（B-R-V-I）系列
CytoFLEX?S系列增加808nm激光后，可提供額外的熒光通道，不但可以用于細(xì)胞死活鑒定染料，也可以用于其光譜與傳統(tǒng)通道重疊程度最小的高亮度熒光標(biāo)記。
該款配置的儀器包含四個(gè)488nm（藍(lán)色）熒光通道、三個(gè)638nm（紅色）熒光通道、四個(gè)405nm（紫色）熒光通道和兩個(gè)808nm（紅外）熒光通道。
儀器本身包含13個(gè)帶通濾光片，可以根據(jù)需要進(jìn)行配置。用戶(hù)可啟用目前研究所需通道，隨著研究的深入，后續(xù)可增加通道數(shù)量。
包括13個(gè)可復(fù)位的帶通濾光片

450/45	585/42	660/10（2）	712/25	840/20
525/40（2）	610/20	690/50	763/43（2）	885/40

可選配置

激光數(shù)	熒光通道	488NM（藍(lán)光）	638NM（紅光）	405NM（紫光）	808NM（紅外光）
4	13	4	3	4	2
3	10	4		4	2
3	9	4	3		2
2	6	4			2

CytoFLEX S性能參數(shù)

最小上樣體積	10μL
檢測(cè)速度（15個(gè)參數(shù)）	30,000 events/s
預(yù)設(shè)流速	10、30 或60 μL/min
進(jìn)樣方式	可配板式自動(dòng)進(jìn)樣器
孔板兼容性	單管；平底、U 型和 V 型底標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板
校準(zhǔn)方式	光路自動(dòng)校準(zhǔn)
軟件	CytExpert采樣與分析軟件
動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)顯示范圍	7個(gè)數(shù)量級(jí)
熒光靈敏度	FITC< 30 MESF，PE<10 MESF
信號(hào)收集系統(tǒng)	Clear Focus，可實(shí)現(xiàn)10-7到107的信號(hào)顯示
最小微粒檢測(cè)值	200nm
激光器	50mW，全固態(tài)，高功率；非共線激發(fā)；具溫控系統(tǒng)，即開(kāi)即用
升級(jí)空間	可至四激光13色
重量	＜22 kg
體積	40.6 cm x 40.5 cm x 33 cm，可安裝在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或標(biāo)準(zhǔn)生物安全柜內(nèi)

·CytoFLEX LX流式細(xì)胞儀
CytoFLEX LX型號(hào)配置六色激光，提供多達(dá)21個(gè)熒光通道，可以簡(jiǎn)化復(fù)雜實(shí)驗(yàn)，滿(mǎn)足用戶(hù)在相關(guān)研究領(lǐng)域的需求。

藍(lán)-紅-紫-黃綠-近紫外-紅外光（B-R-V-Y-N-I）系列
CytoFLEX LX 該款流式細(xì)胞儀可同時(shí)檢測(cè)23個(gè)參數(shù)，包括21個(gè)熒光參數(shù)。配置時(shí)，其不同波長(zhǎng)激光的熒光通道數(shù)如下：488nm（藍(lán)色）：3個(gè)；638nm（紅色）：3個(gè)；405nm（紫色）：5個(gè)；561nm（黃綠色）：5個(gè)；375nm（近紫外）：3個(gè)；以及808nm（紅外光）：2個(gè)。
儀器包括21個(gè)帶通濾光片，可根據(jù)需要進(jìn)行配置。用戶(hù)可啟用目前研究所需通道，隨著研究的深入，后續(xù)可增加通道數(shù)量。
包括21個(gè)可復(fù)位的帶通濾光片

450/45（2）	525/40（2）	525/45	585/42	610/20（3）	660/10（2）	675/30（2）
690/50	710/50	712/25	763/43（3）	840/20	885/40

可選配置

激光數(shù)	熒光通道	488NM（藍(lán)光）	638NM（紅光）	405NM（紫光）	561NM（黃綠光）	375NM （近紫外光）	808NM（紅外光）
6	21	3	3	5	5	3	2
5	19	3	3	5	5	3

CytoFLEX LX性能參數(shù)

側(cè)向散射光分辨率	藍(lán)光（488nm）＜300nm；紫光（405nm）＜200nm
熒光靈敏度	FITC< 30 MESF，PE<10 MESF
檢測(cè)速度（15個(gè)參數(shù)）	30,000 events/s
信號(hào)處理	全數(shù)字化系統(tǒng)，7個(gè)十進(jìn)制數(shù)據(jù)顯示
鞘液和樣品傳輸	超低壓蠕動(dòng)泵
樣品流速	固定流速：10、30及60μL/min 自定義流速控制：10-240μL/min，按1μL增量調(diào)節(jié)
板孔進(jìn)樣模式	96孔標(biāo)準(zhǔn)平底，U和V底板
動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)顯示范圍	7個(gè)數(shù)量級(jí)
軟件	CytExpert采樣與分析軟件
標(biāo)準(zhǔn)化校準(zhǔn)	自動(dòng)校準(zhǔn)增益參數(shù)值
補(bǔ)償	自動(dòng)/手動(dòng)全矩陣補(bǔ)償
體積	60.5 cm x 73.3 cm x 45.1 cm
重量	79kg

參考文獻(xiàn)

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