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水中糞大腸菌群的常見檢測方法

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更新時間：2023-02-22 07:51:05瀏覽次數：707次

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水中糞大腸菌群檢測通過將污染水樣接種入多根試管中進行恒溫培養,利用大腸菌群繁殖時使乳糖發酵,并能使乳糖蛋白胨培養液變黃,同時產生氣泡的*現象.

詳細介紹

水是人類賴以生存的基礎，隨著人類社會生產的發展和技術的進步，水質污染現象日趨嚴重。病原微生物污染是我國水體污染的主要原因之一。污染水體的病原微生物種類繁多，而水中糞大腸菌群是水體糞便污染的指示菌，通過監測該項目可以準確的判斷監測水域內污染程度，有效預報和控制流行疾病的發生與傳播。
常見的水中糞大腸菌群檢測方法如下：
1、多管發酵法
通過將污染水樣接種入多根試管中進行恒溫培養，利用大腸菌群繁殖時使乳糖發酵，并能使乳糖蛋白胨培養液變黃，同時產生氣泡的*現象，根據不同接種量的發酵管所表現陽性結果的數目，從MPN表中查的相應的MPN指數，計算每升水中糞大腸菌群的最近似值。
2、濾膜法
將水樣注入已滅菌的放有孔徑為0。45μm濾膜的濾器中，經過抽濾，將細菌截留在膜上，然后將濾膜貼于M-FC培養基上，經44。5℃溫度下進行培養，計數培養基上呈藍色或藍綠色的菌落，計算出每升水的糞大腸菌數。
3、紙片法
采用紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過糞大腸菌群在上面的生長、顯色來測定的方法，即糞大腸菌在紙片培養基上呈紅色菌落，菌落周圍產生黃圈是糞大腸菌分解乳糖產酸使指示劑變色的結果。
4、酶底物法
將加入酶底物檢測試劑的100ml水樣注入51孔或97孔的定量測量盤中進行密封后培養，由于大腸菌群細菌能產生一種β-半乳糖苷酶分解PG使得培養液呈黃色，同時大腸埃希氏菌可以產生葡萄糖醛酸酶分解MUG，培養液將會在波長366nm紫外光下產生熒光反應。通過計算有黃色反應和熒光反應的孔穴數，可對照MPN表查出其代表的糞大腸菌群最可能數。
5、聚合酶鏈式技術
提取糞大腸菌群混懸液和待測水樣的DNA，利用PCR技術擴增編碼約260bp的LacZ基因（β-半乳糖苷酶基因）和約150BP的UdiA基因（β-D-半乳糖苷酶基因）的DNA片段，分別檢測大腸菌群數和大腸桿菌。
6、熒光原位雜交技術
由于糞大腸菌群特異的DNA序列，借助熒光標記的特異寡聚核苷酸片段作為的探針與待測水樣中的DNA分子雜交，將雜交細胞經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量分析，確定菌群數。
目前，大腸菌群檢測方法發展很快，已提高到分子生物學水平，使檢測更快速、準確。酶底物法以其操作簡便、檢測周期短，將取代多管發酵法、濾膜法等傳統方法，尤其是酶底物法采用密封培養技術，在檢測醫院污水時可以減少人員接觸而降低檢測人員的致病風險，因此具有更強的實用價值和應用價值，正是目前水中糞大腸菌群的快速檢測標準方法之一。