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革蘭氏染色法

閱讀:2401發布時間:2012-4-12

革蘭氏染色法是細菌學中zui常用的一種鑒別染色法。 

   

     

    1.葡萄球菌和大腸桿菌混合菌液。

    2.結晶紫染色液。

    3.革蘭氏碘液。

    495%酒精。

    5.番紅染液。

    6.載玻片。

    

    一、涂片標本的制備(見實驗一)

    二、革蘭氏染色法 

    1.初染:在上述已固定的涂片上,滴加結晶紫染液,染色1分鐘,水洗。

    2.媒染:滴加革蘭氏碘液,作用1—3分鐘,水洗。

    3.脫色:滴加 95%酒精,并頻頻搖動玻片,至無紫色脫出為止(約20秒),水洗。

    4.復染:加番紅染液,復染半分鐘,水洗,用吸水紙印干后,油鏡檢查。

    結果:視野中可以察見兩種細菌:

    葡萄球菌:紫色、球形、葡萄狀排列。

    大腸桿菌:紅色、桿狀、散在排列。

【附】革蘭氏染色法各種染液的配制 

    一、結晶紫(Cystal   violet)染液

    結晶紫    2.0g

    草酸銨    0.8g

    95%酒精 20ml

    蒸餾水    80ml

    先將結晶紫溶于酒精,草酸銨溶于蒸餾水中,然后將兩液混合,靜置48小時使用。此染液穩定,置密閉的棕色瓶中可儲存數月。

    二、革蘭氏碘液

             1.0g

    *     2.0g

    蒸餾水     300ml

先將碘與*混合,加水少許,略加搖動,待碘*溶解后再加蒸餾水至定量。

三、脫色劑:95%酒精

四、復染劑:番紅(沙黃Safranine O)染液

沙黃(Safranine O) 0.25g

95%乙醇 10ml

蒸餾水 適量

將沙黃溶解于95%乙醇中,待*溶解再加蒸餾水至100ml


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