產品咨詢：
德國拜發 R-Biopharm ELISA KITS試劑盒 酶聯免疫法定量檢測* M1
RIDASCREEN® Aflatoxin M1 30/15
體外診斷試劑
儲存溫度 2 - 8 °C
產品咨詢：
產品簡介
RIDASCREEN® Aflatoxin M1 30/15* M1 檢測試劑盒，采用競爭性酶聯免疫法定量測定奶類、奶粉和奶酪中的* M1 的含量。
試劑盒中含有酶聯免疫檢測所需的所有試劑，包括標準品。
試劑盒足夠進行96次檢測（包括標準測定）。
定量分析需要使用微孔板酶標儀。
樣品處理：
奶類樣品：脫脂
奶粉樣品：溶解，脫脂
奶酪樣品：提取，離心
檢測時間： 樣品制備（以10個樣品為例）
奶類和奶粉樣品 ...........................................約 0.5小時
奶酪樣品.........................................................約 2小時
檢測過程（孵育時間）.........................................1小時
檢測限： 奶類樣品：.............................................................5 ppt
奶粉樣品（相對于溶解后的液態樣品）：..............5 ppt
奶粉樣品（相對于溶解前的粉制樣品）：............50 ppt
奶酪樣品：.......................................................... 50 ppt
回收率： 在人工添加的全脂奶樣品中
（10 - 80 ppt）：..............................................約95 %
（變異系數：約14 %）
奶粉樣品：........................................................約95 %
奶酪樣品：..................................................... 約102 %
（變異系數約11 %）
特異性： RIDASCREEN® Aflatoxin M1 30/15 * M1 檢測
試劑盒的特異性根據與相關霉菌毒素的交叉反應確定。
* M1 .................................................... 100 %
* M2 ...................................................... 30 %
1. 用途
RIDASCREEN® Aflatoxin M1 30/15* M1 檢測試劑盒，采用競爭性酶聯免疫法定量測定奶類、奶粉和奶酪中的* M1 的含量。
2. 概要
*是由霉菌 Aspergillus flavus 及 Aspergillus parasiticus 產生的致癌的高毒性代謝產物。* M1，即所謂的牛奶*是* B1 的代謝產物，它隱藏于由食用了含* B1 的飼料的奶牛所產的牛奶中。
* M1 能在常規的巴氏法消毒后繼續存活，故其是生產原材料樣品和成品的必檢項目。
1999年 1月起歐盟范圍內規定了*殘留*。其中* M1 的殘留*值為 0.05 µg/l （50 ppt）。
3. 檢測原理
檢測的基礎是抗原抗體反應。微孔板包被有特殊的* M1 抗體。加入標準品或樣品溶液和在洗滌步驟后加入的酶標記* M1 （酶連接物）。游離的* M1 和酶連接物競爭抗體結合位點（競爭性酶聯免疫分析）。沒有結合的酶連接物在洗滌步驟中被除去。
在孔中加入底物/發色劑，結合的酶連接物將發色劑轉化為藍色。加入反應終止液后顏色由藍色轉變為黃色。在 450 nm處測量，吸光度值與樣品中的* M1 濃度成反比。
4. 試劑盒組份
每一個盒中的試劑足夠進行 96次檢測（包括標準測定）。盒中的組份如下：
1 x 96孔微孔板（12條每條8孔）
包被有針對* M1 的抗體
6 x 標準品（每瓶1.3 ml）
0 ppt（零標準品），5 ppt， 10 ppt， 20 ppt， 40 ppt， 80 ppt
含有* M1 的奶緩沖液
1 x 酶連接物（1.3 ml）..........................................................................紅色瓶蓋
過氧化物酶標記的* M1
濃縮液
1 x 底物/發色劑（10 ml）................................棕色瓶蓋紅色，含有四甲基聯苯胺
1 x 反應終止液（14 ml）..................................
含1 N 的硫酸
1 x 緩沖液1（20 ml）
樣品稀釋緩沖液
1 x 緩沖液2（12 ml）............................................................................白色瓶蓋
酶連接物稀釋緩沖液
1 x 洗滌緩沖液（鹽）
用于制作 10 mM 的磷酸緩沖液，pH 7.4
含有0.05 % Tween 20
5.另需的試劑和設備
5.1. 設備：
− 微孔板酶標儀（450 nm）
− 離心機
− 巴氏吸液管
− 刻度移液管
− 可調式20 µl - 200 µl 和 200 - 1000 µl 微量移液管
− 僅用于奶酪樣品
− 振蕩器
− 蒸發器
5.2. 試劑：
− 僅用于奶酪樣品
− 甲醇
− n - 庚烷
− 二氯甲烷
− PBS - 緩沖液，pH 7.2：0.55 g NaH2PO4 x H2O + 2.85 g Na2HPO4 x 2 H2O + 9
g NaCl，加蒸餾水至1000 ml
6. 操作者應該注意之事項
標準品中含有* M1，應特別小心。避免皮膚接觸（使用手套）。
玻璃器具和有毒溶液用次氯酸鈉溶液（10 % （v/v））浸泡消毒過夜（用 HCl 調節
溶液 PH 值為7） 。
反應終止液為1 N 硫酸（R36/38， S2-26）。
7. 儲存條件
保存試劑盒于 2 - 8 °C，不要冷凍。
將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封儲存于 2 - 8 °C條件下。
*對光敏感，因此標準品要避免直接暴露在光線下。
底物/發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
對過了有效期（見試劑盒標簽）的試劑盒不再提供任何質量保證。
不能交叉使用不同批號的盒中試劑。
8. 試劑變質的跡象
− 紅色的底物/發色劑在使用前發現顏色變藍
− 零標準品的吸光度值小于0.6 （E450 nm < 0.6）
9. 樣品處理
樣品應當冷藏保存。
9.1.奶類樣品
−用冷凍離心機在10 min / 3500 g / 10 °C 條件下去除脂肪（如果沒有冷凍離心機，必須在離心前將樣品冷卻到 10 °C）
−離心后可用巴氏吸液管*去除表面的奶油
−取脫脂牛奶用于檢測（每孔 100 μl） （稀釋倍數1）
直接處理方法
−取牛奶20ul 和180ul 緩沖液1混合（1： 10 的比例稀釋），每孔取100 µl 進行檢測（稀釋倍數10）
9.2. 奶粉樣品
−稱取10 g 奶粉樣品于燒杯中，加入去離子水至 100 ml
−攪拌5分鐘使其充分溶解
−然后按奶類樣品進行處理（參見 9.1）
9.3. 奶酪樣品
對采集的代表性樣品進行粉碎和混合，不要加入任何液體。對于表面長有霉菌的樣品去掉表面，因為其會影響檢測結果。
− 稱取 2 g 粉碎后的奶酪樣品于可密閉的玻璃容器中
− 加入 40 ml 二氯甲烷攪拌或者振蕩15分鐘提取
− 濾去懸浮物，取10 ml 濾液蒸干（微弱氮氣流中，60 °C）
− 油狀殘留物用 0.5 ml 甲醇、0.5 ml PBS緩沖液（參見 5.2.）和1 ml 庚烷溶解、充分混合
− 離心：15 min / 2700 g / 15 °C
− *去除上層庚烷層
− 用巴氏吸液管小心吸出下層的部分甲醇-水溶液
− 其中的100 µl和400 µl緩沖液1混合（1：5的比例稀釋），每孔取100 µl 進行檢測
備注：
如果還需要繼續進行稀釋，使用緩沖液 1（參見 4）
10. 檢測步驟
10.1. 檢測前的準備
使用之前將所有試劑回溫至室溫（20 - 25 °C）。
*M1酶連接物（紅色瓶蓋的瓶子）為濃縮液。因為稀釋的酶連接物的弱穩定性，所以應嚴格根據用量用緩沖液 2 進行稀釋。在使用酶連接物前要仔細地輕輕振搖。用緩沖液 2（白色瓶蓋瓶子）對酶連接物濃縮液按照 1:11（1+10）的比例進行稀釋。（比如：400 µl 濃縮液+ 4 ml 緩沖液，足夠進行4條微孔板條的檢測）。
洗滌緩沖液是 PBS-Tween 緩沖液，為此試劑盒中提供了一袋洗滌緩沖液鹽（參見4.）。使用1 l 蒸餾水溶解一袋洗滌緩沖液鹽制得洗滌緩沖液。制備好的洗滌緩沖液可在2 - 8 °C下保存大約 4 - 6周時間。
或者： 用100 ml蒸餾水溶解袋中的洗滌緩沖液鹽，得到10倍的洗滌緩沖液鹽濃縮液，此溶液能在室溫（20 - 25 °C）下儲存 8 - 12周。使用時，用9份蒸餾水溶解 1份此濃縮液得到洗滌緩沖液。
10.2. 檢測操作
仔細進行洗板的操作非常重要。在使用中不要讓微孔出現干燥。
1. 將足夠標準品和樣品檢測所需數量的孔條插入微孔板架。記錄標準品和樣品的位置。
2. 將100 µl 標準品或者按照步驟9處理后的樣品加入相應的微孔中，均做兩個平行實驗。充分混合后，在室溫下（20 - 25 °C）暗處孵育30分鐘。
3. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打 3 次）以保證*除去孔中的液體。加入 250 μl 洗滌緩沖液（參見 10.1.）洗滌，上述操作重復進行兩遍。
4. 然后向對應的微孔中加入 100 µl 稀釋后的酶連接物溶液，小心用手震蕩混合后在室溫下（20 - 25 °C）避光孵育15分鐘。
5. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打 3 次）以保證*除去孔中的液體。加入 250 μl 洗滌緩沖液（參見 10.1.）洗滌，上述操作重復進行兩遍。
6. 向每一個微孔中加入 100 μl 底物/發色劑（棕色瓶蓋），充分混合后在室溫下（20 - 25 °C）暗處孵育15分鐘。
7. 向每一個微孔中加入 100 μl 反應終止液（黃色瓶蓋），充分混合。在加入反應終止液后 15分鐘內于450 nm處測量吸光度值。
11. 結果評估
請使用R-Biopharm德國拜發公司專門為RIDASCREEN® 系列產品設計的應用軟件
RIDA® SOFT Win（訂貨號：Z9999）來進行結果分析。
關于標準曲線請參看試劑盒中附帶的質保證書。
以下是沒有使用軟件的計算方法：
標準品的吸光度值（或樣品）
----------------------------- x 100 = % 吸光度比值
零標準品的吸光度值
吸光度值以百分比表示，因此零標準品等同于 100 %。計算標準品相應的比值，并繪成一個與*M1 [ng/l] 相關的半對數坐標系統的曲線圖。
為了真實反映*M1的濃度，從校正曲線上讀出的濃度值必須乘以相對應樣品的稀釋倍數。按照說明書中給出的方法進行操作，可得到以下樣品稀釋倍數：
奶類樣品........................................................................... 1
奶粉樣品（相對于溶解后的液態樣品） ............................ 1
奶粉樣品（相對于溶解前的粉制樣品） ............................ 10
奶粉樣品.......................................................10
【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司
【】
【】
【電子郵件】 Hong@jianlun.com
【騰訊 】
【公司】 www.lsbuy.com
【營銷中心】 廣州市中山大道中358號東溪大廈B座511室
【公司地址】 廣州市天河區車陂第十五工業園一幢4067室
