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YIJI石蠟載玻片特恩布爾（TURNBULL-DAB）非血紅素鐵（二價(jià)）強(qiáng)化染色試劑盒

產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI石蠟載玻片特恩布爾（TURNBULL-DAB）非血紅素鐵（二價(jià)）強(qiáng)化染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)分離石蠟方法和氰正鐵酸鹽結(jié)合反應(yīng)技術(shù)，進(jìn)一步使用二氨基聯(lián)苯胺的強(qiáng)化擴(kuò)增，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中二價(jià)亞鐵離子（ferrous ion）沉積現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良TURNBULL方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種石蠟包埋組織切片樣品中的二價(jià)亞鐵離子檢測(cè)。廣泛用于各種神經(jīng)細(xì)胞或組織病理生li的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

二價(jià)鐵（ferrous）是氧化數(shù)為二的鐵。二價(jià)鐵溶解性好，生物學(xué)效價(jià)優(yōu)于三價(jià)鐵，因此鐵首先應(yīng)被還原為二價(jià)鐵，才容易被生物體吸收利用。動(dòng)物和人體的整個(gè)消化道都可以吸收，植物在根尖處吸收。機(jī)體大約有三分之二的鐵存在于紅細(xì)胞的血紅蛋白和肌肉的肌紅蛋白中，20％的鐵以不同形式存在于肝、脾和其他組織中。鐵作為氧的載體，保證組織內(nèi)氧的正常輸送，在細(xì)胞生物氧化和能量代謝過程中發(fā)揮著重要作用。由于中樞神經(jīng)組織細(xì)胞等含有非血紅素性鐵的輕度沉積，使用常規(guī)的染色方法敏感性不足，采用二氨基聯(lián)苯胺（3,3’-diaminobenzidine，DAB）的強(qiáng)化擴(kuò)增效應(yīng)，分二價(jià)鐵沉積現(xiàn)象。通過酸性氰正鐵酸鹽（ferricyanide）與組織細(xì)胞中二價(jià)正鐵離子（ferrous ion）結(jié)合，成為鐵氰亞鐵（ferrous ferricyanide），進(jìn)而催化二氨基聯(lián)苯胺的氧化，電子供體DAB失去電子，而呈現(xiàn)出顏色變化和沉積，形成棕褐色不溶性產(chǎn)物。其反應(yīng)原理如下：

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI脫蠟液（Reagent A）        毫升

YIJI補(bǔ)水液A（Reagent B） 毫升

YIJI補(bǔ)水液B（Reagent C） 毫升

YIJI補(bǔ)水液C（Reagent D） 毫升

YIJI清理液（Reagent E） 毫升

YIJI染色液（Reagent F） 毫升

YIJI酸性液（Reagent G） 毫升

YIJI封阻液（Reagent H） 毫升

YIJI顯色液（Reagent I） 毫升

YIJI反應(yīng)液（Reagent J） 毫升

產(chǎn)品說明書 1份

保存方式

保存YIJI顯色液（Reagent I）在-20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent F）和YIJI顯色液（Reagent I），避免光照；YIJI染色液（Reagent F）和YIJI酸性液（Reagent G）具有腐蝕性和毒性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

2毫升離心管：用于染色工作液配制的容器

小型染色缸：用于組織細(xì)胞染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于組織細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 脫蠟處理

• 取出10片待測(cè)的石蠟包埋的5微米厚的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，此步很重要）
• 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）

二、樣本染色處理

操作開始前，將4℃冰箱里的試劑盒中的YIJI染色液（Reagent F）和YIJI酸性液（Reagent G）置入室溫下，分別移出1毫升到2.2毫升離心管，混勻后，標(biāo)記為YIJI染色工作液，用錫箔紙包裹，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 小心加上xx微升YIJI染色工作液，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育60分鐘；或直至可見籃色
• 小心移去切片上的YIJI染色工作液
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent E）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）  

三、 樣本顯色處理

實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里試劑盒中的YIJI顯色液（Reagent I）置入冰槽里融化，然后移取xx微升YIJI顯色液（Reagent I）和xx毫升YIJI反應(yīng)液（Reagent J）到2.2毫升離心管，充分混勻，標(biāo)記為YIJI顯色工作液，置于暗室。YIJI顯色液（Reagent I）用完即刻放回－20℃冰箱里。

• 小心加上xx微升YIJI封阻液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育20分鐘
• 小心移去切片上的YIJI封阻液（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent E）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）（注意：須清洗干凈，否則影響下一步操作）
• 小心加上xx微升YIJI顯色液（Reagent I）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育20分鐘，避免光照
• 小心移去切片上的YIJI顯色液（Reagent I）
• 小心加上xx微升YIJI顯色工作液在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育15分鐘，或直至肉眼可見棕黑色沉積，避免光照
• 小心移去切片上的YIJI顯色工作液 
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent E）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent E）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：二價(jià)鐵沉積陽性細(xì)胞呈現(xiàn)棕褐色

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套和防護(hù)面罩
• 建議在通風(fēng)柜里操作
• 所有操作在室溫下進(jìn)行
• YIJI染色液（Reagent F）和YIJI酸性液（Reagent G）具有腐蝕性和毒性，注意操作安全
• 每次更換試劑溶液時(shí)，保持切片面基本晾干。空氣中晾干狀態(tài)為沒有水滴，呈濕潤(rùn)狀態(tài)，可見反光
• 試劑溶液在切片表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿切片表面
• YIJI顯色液（Reagent I）避免反復(fù)凍融
• YIJI顯色工作液不能儲(chǔ)存后使用；如果發(fā)現(xiàn)沉淀，不宜使用
• 樣品染色避免過度，肉眼可見棕色即可終止染色
• 組織細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細(xì)胞金屬元素染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

訂購(gòu)信息

單組份訂購(gòu)信息

編號(hào) 名稱 規(guī)格

YJ80082.4 YIJI石蠟載玻片特恩布爾非血紅素鐵（二價(jià)）強(qiáng)化染色試劑盒 50次

YJ80082.4A YIJI脫蠟液（Reagent A） 毫升

YJ80082.4B YIJI補(bǔ)水液A（Reagent B） 毫升

YJ80082.4C YIJI補(bǔ)水液B（Reagent C） 毫升

YJ80082.4D YIJI補(bǔ)水液C（Reagent D） 毫升

YJ80082.4E  YIJI清理液（Reagent E） 毫升

YJ80082.4F  YIJI染色液（Reagent F） 毫升

YJ80082.4G YIJI酸性液（Reagent G） 毫升

YJ80082.4H  YIJI封阻液（Reagent H） 毫升

YJ80082.4I  YIJI顯色液（Reagent I） 毫升

YJ80082.4J  YIJI反應(yīng)液（Reagent J） 毫升 

試劑盒訂購(gòu)信息