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YIJI 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

主要用途

YIJI 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級(jí)熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過(guò)透膜熒光染色劑二氯熒光乙

酰乙酸鹽，在組織氧化損傷條件下，產(chǎn)生熒光，來(lái)定量檢測(cè)冰凍組織內(nèi)活性氧族的存在狀況的而經(jīng)典

的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適宜于冰凍動(dòng)物組織的分析。可以被用

于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)易，定性檢測(cè)，

性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過(guò)氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基

（hydroxyl radical；OH-）、過(guò)氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過(guò)氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷

氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）

次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等

細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。2',7'-二氯熒光

乙酰乙酸鹽（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一種*自由通過(guò)細(xì)胞膜的染色劑。一旦被過(guò)

氧化氫、過(guò)氧化基、過(guò)氧亞硝基陰離子等氧化，便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測(cè)定組織細(xì)胞內(nèi)活性氧族的濃度。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI 清理液（Reagent A）       毫升

YIJI 染色液（Reagent B）       微升

YIJI 稀釋液（Reagent C）       毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書                     1份

保存方式

保存 YIJI 染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保

證 12 月

用戶自備

1.5 毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養(yǎng)箱：用于染色孵育

熒光顯微鏡：用于觀察熒光組織

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI 稀釋液

（Reagent C）置于室溫預(yù)熱。然后移出

微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新的 1.5 毫升離心管，

加入微升 YIJI 稀釋液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為 YIJI 染色工作液，置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

1． 準(zhǔn)備 5 片待測(cè)的厚為 10 微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片

2． 置于室溫下，小心加上

4． 小心加上     微升預(yù)冷的 YIJI 清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)切片表面

3． 小心移去切片上的 YIJI 清理液（Reagent A）微升室溫預(yù)熱的 YIJI 染色工作液，鋪滿整個(gè)切片表面

5． 在 37℃濕潤(rùn)培養(yǎng)箱里，孵育 20 分鐘（注意：避免液體蒸發(fā)）

6． 小心移去切片上的 YIJI 染色工作液，避免光照

7． 小心加上  微升 YIJI 清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)切片表面

8． 小心移去切片上的 YIJI 清理液（Reagent A）

9． 放上蓋玻片或封片

10．即刻在熒光顯微鏡下觀察（定性檢測(cè)）：激發(fā)波長(zhǎng) 490nm，散發(fā)波長(zhǎng) 530nm――熒光增強(qiáng)，表明活性氧

族（ROS）含量高

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為 50 次操作

2． 所有操作均須無(wú)菌狀態(tài)下進(jìn)行

3． 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后 1 小時(shí)內(nèi)）制成的冰凍切片

4． 操作時(shí)，須戴手套

5． YIJI 染色工作液避免光照

6． 孵育時(shí)，須避免光照

7． 建議組織染色完成后，即刻進(jìn)行熒光定性分析

8． 本公司提供陽(yáng)性對(duì)照甲萘醌溶液，觀察組織熒光增強(qiáng)現(xiàn)象

9． 本公司提供系列活性氧檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

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