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體液葡萄糖氧化酶比色法定量檢測試劑盒
點擊次數：749 發布時間：2014-12-10
YIJI體液葡萄糖氧化酶比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
YIJI 體液葡萄糖氧化酶比色法定量檢測試劑是一種旨在通過葡萄糖氧化酶和過氧化物酶的雙酶反應
體系中，葡萄糖氧化產生的過氧化氫，與顯色染料鄰聯茴香胺發生反應，在分光光度儀下，產生吸光峰值
的變化，即采用比色法測定體液樣品中葡萄糖氧化酶活性的而經典的技術方法。該技術由大師級科學
家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種體液（血液、尿液等）葡萄糖氧化酶的活性檢測。產品嚴格
無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。
技術背景
葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase；EC1.1.3.4），又稱為葡萄糖氧氣氧化還原酶（β-D-Glucose:oxygen
1-oxidoreductase），是一種黃素酶（flavoenzyme）。其分子量為160kd，有同源雙體構成。葡萄糖氧化酶的
作用在于特異性地催化β-D-葡萄糖，而不是α-D-葡萄糖的氧化反應，產生δ-葡萄糖酸內酯
（gluco-delta-lactone）和過氧化氫。葡萄糖氧化酶通常應用于體液、食物和農作物中游離葡萄糖的濃度檢
測；其次，在食品工業上，用于食品包裝中去氧等。基于底物葡萄糖，在葡萄糖氧化酶的催化下，氧化產
生過氧化氫，在過氧化物酶（peroxidase）的作用下，使顯色染料還原型鄰聯茴香胺（reduced o-dianisidine）
轉化為氧化型鄰聯茴香胺（oxidized o-dianisidine），在分光光度儀（500nm 波長）下，呈現吸光峰值的變
化，來檢測樣品中葡萄糖氧化酶的活性。其反應系統為：
產品內容
YIJI緩沖液（Reagent A） 毫升
YIJI反應液（Reagent B） 毫升
YIJI底物液（Reagent C） 毫升
YIJI催化液（Reagent D） 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里；YIJI反應液（Reagent B）避免光照；有效保證6月
用戶自備
抗凝管：用于血液采集的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
15毫升錐形離心管：用于反應液配制的容器
微型臺式離心機：用于樣品制備
氧氣罐：用于試劑充氧
1比色皿：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
實驗步驟
一、 樣品準備
選擇一：血漿樣品
1． 準備好肝素或 EDTA抗凝管（注意：避免使用 ACD抗凝管）
2． 抽取 1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放進 4℃微型臺式離心機離心 10分鐘，速度為 700g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）
4． 小心移取上層黃色液體到新的 1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
5． 移取 10 微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YIJI Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒－
YIJI30030.1）
6． 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
選擇二：血清樣品
1． 準備好不含抗凝劑的儲存管
2． 抽取 1毫升血液，置于儲存管里
3． 室溫下，靜置 30分鐘，直至血液凝結
4． 放進 4℃微型臺式離心機離心 15分鐘，速度為 2000g（或 5000RPM，例如 eppendorf 5415）
5． 小心移取上層黃色液體到新的 1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
6． 移取 10 微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YIJI Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒－
YIJI30030.1）
7． 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
選擇三：尿液/腦脊液/唾液/精液樣品
1． 準備好 1.5毫升離心管
2． 移取 1毫升液體到離心管
3． 放進 4℃微型臺式離心機離心 10分鐘，速度為 700g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）
4． 小心移取上清液到新的 1.5毫升離心管
5． 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
二、 測讀準備
1． 準備好上述制備的樣品，置于冰槽里融化
2． 設定好分光光度儀：波長 500nm，間隔 1分鐘，讀數 6次（共 5分鐘），并置零或設置 0分鐘和 5分鐘各測讀 1次
3． 檢測開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑置入冰槽里融化，然后移出 xx毫升 YIJI緩沖液
（Reagent A）到新的 15毫升離心管，加入 xx微升 YIJI反應液（Reagent B）和 xx毫升
YIJI底物液（Reagent C），充分混勻后，標記為 YIJI反應工作液，置于冰槽里，避
免光照。
4． （選擇步驟）接上氧氣進行充氧 5分鐘后使用（注意：參見注意事項 4）
三、 背景對照測定
1． 移取 xx毫升 YIJI反應工作液到新的 3毫升比色皿
2． 加入 xx微升 YIJI催化液（Reagent D）
3． 室溫下孵育 2分鐘
4． （選擇步驟）放進分光光度儀，置零
5． （選擇步驟）取出比色皿
6． 加入 xx微升 YIJI緩沖液（Reagent A）
7． 上下傾倒數次，混勻
8． 即刻放進分光光度儀檢測，此為背景空對照（5分鐘讀數－0分鐘讀數）
四、 樣品測定
1． 移取 xx毫升 YIJI反應工作液到新的 3毫升比色皿
2． 加入 xx微升 YIJI催化液（Reagent D）
3． 室溫下孵育 2分鐘
4． （選擇步驟）放進分光光度儀，置零
5． （選擇步驟）取出比色皿
6． 加入 100微升待測樣品
7． 上下傾倒數次，混勻
8． 即刻放進分光光度儀檢測，此為樣品讀數（5分鐘讀數－0分鐘讀數）
五、計算樣品活性
【（樣品讀數－背景讀數）X xx（毫升；體系容量）X樣品稀釋倍數】÷【xx（毫升；樣品容量）X xx（毫
摩爾吸光系數）X xx（反應時間；分鐘）X2 】＝單位/毫升或微摩爾 β-D-葡萄糖/分鐘/毫升
注意事項
1． 本產品為 20次操作，包括背景對照
2． 操作時，須戴手套；YIJI反應液（Reagent B）具有毒性，注意操作安全
3． 每增加 1個樣品，增加 YIJI反應工作液為：YIJI緩沖液（Reagent A）2毫升＋YIJI
反應液（Reagent B）300微升＋YIJI底物液（Reagent C）500微升，以此類推。配制反應工作
液時，須根據樣本數量配制實際工作液容量
4． YIJI反應工作液配制后，可以接上氧氣進行充氧 5分鐘后使用，充氧與未充氧的酶活性關系為：
充氧酶活性 X 0.6＝未充氧酶活性；注意顯示數據時指明為充氧或未充氧狀態
5． 系統操作過程中，背景測定只需 1次
6． 加樣后 3秒內進行比色測定
7． 比色測定后，比色皿須清洗*
8． 樣本測定 5分鐘讀數高于0分鐘讀數表明具有酶活性；如果計算酶動力學，選擇線性段單位時間的差值
9． 葡萄糖氧化酶活性單位濃度定義：在 25℃室溫下，pH 5.1的情況下，每單位酶在單位時間內（每分鐘）
氧化 1微摩爾的 β-D-葡萄糖為葡萄糖酸內酯和過氧化氫
10．如果樣本酶活性過低或過高，則可以增加或降低樣本量
11．本公司提供系列營養學試劑產品