細胞培養操作
收貨方式		T25瓶	凍存管
收貨處理		觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養箱放置2-4h，以便穩定細胞狀態	收到細胞后，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇
傳代密度		細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養	第二天換液并檢查細胞密度
傳代比例		傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿	一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶
傳代方法		a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。 c、按6-8 mL/瓶補加培養基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。 d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。	將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
注意事項		1.運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。	1.收貨時若發現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存； 2.為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。
到貨須知	1.收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否*揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。 2.靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據)；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。 3.由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。
備注：客戶在細胞培養過程中，有任何技術問題技術服務電話我們隨時給予解答。
三、細胞凍存操作
凍存液配方	無血清凍存液，液氮儲存
細胞密度	待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例
凍存方法	a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項	凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案