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南京江苑生物科技有限公司
293T,HEK-293T,人胚腎細胞,人胚腎細胞株293插入SV40 T-抗原基因后產生的高轉染效率的衍生株稱為293T。該細胞最初的名字293tsA1609neo,攜帶SV40復制序列,被廣泛用于逆轉錄病毒生產、基因表達和蛋白表達。
293T,HEK-293T,人胚腎細胞
運輸和保存
1.1 mL凍存管包裝干冰運輸,收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇。若發現干冰已經揮發干凈、凍存管蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
2.T25瓶培養的細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
培養瓶細胞接收后的處理
1.收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2培養箱中靜置3-4 h,以穩定細胞狀態。若發現培養瓶破損、有液體溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2.請在顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照,10倍和20倍各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后依據。
3.細胞收貨脫落:293T細胞貼壁能力弱,收貨如有大面積脫落的細胞團為正常現象。若細胞在快遞運輸途中因振動脫落,先將培養瓶放入37℃,5%CO2培養箱中靜置3-6 h,讓少數脫落的細胞可再附著生長。若仍有脫落聚集的細胞,則 (1) 收集所有細胞懸液,1000 rpm離心5 min,保留沉淀;(2) 添加胰dan白酶消化液0.5 mL至離心管中,重懸沉淀,置于37℃消化1-2 min左右;(3) 向離心管內加入5 mL*培養基終止消化;(4) 1000 rpm,離心5 min,丟棄上清,用5 mL*培養基(補加1-5% FBS,促進貼壁)重懸沉淀,接種于新的培養瓶內;(5) 待細胞*貼壁后,培養觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的*培養基。
4.收貨細胞的培養和傳代:在顯微鏡下觀察細胞生長狀態,若細胞生長密度在60%以下,可去除培養瓶中的灌液培養基,加入新配制的*培養基,置于培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達80%-90%以上,可以對細胞進行傳代處理。
5.運輸用的培養基(灌液培養)不能再用來培養細胞,請換用合適的新鮮培養基來培養細胞。
凍存細胞接收后的處理
收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇。
細胞復蘇:將含有1 mL細胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍,回溫后噴以75 %酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內。將凍存管中細胞加入到含4-6 mL*培養基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min,棄去上清液,*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入培養瓶/培養皿中,培養箱中孵育。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
293T培養注意事項
1.293T貼壁能力較弱,加液、換液、洗滌時,須動作輕柔,避免用液體直沖細胞,會造成細胞脫落。細胞生長不能過密,過密細胞容易脫落,脫落下來的細胞可以通過離心收集,使消化后繼續培養。
2.293T細胞狀態直接影響病毒包裝效率。當細胞傳代次數過多、細胞增殖速度減緩、細胞貼壁能力非常弱(輕柔換液也能導致細胞半數脫落)時,說明細胞狀態不好,會大幅降低病毒包裝效率。
3.使用高糖DMEM培養293T,低糖DMEM或者DMEM/F12等含糖量低的培養基可能影響293T細胞的生長狀態。
4.如果發生293T細胞不貼壁,漂浮在培養基中的現象,請確認所使用的DMEM中碳suan氫鈉濃度及培養箱中CO2濃度。并參考以下培養體系:
① DMEM由1.5 g/L碳suan氫鈉配制而成,使用5% CO2培養箱。
② DMEM由3.7 g/L碳suan氫鈉配制而成,使用10% CO2培養箱。
當使用碳suan氫鈉含量高的培養基時,必須將這些細胞在10% CO2中孵育,以便6正確緩沖培養基。當培養基沒有適當緩沖時,293T細胞雖然可以存活,但將無法粘附并保持漂浮在培養基中。
5.培養時可酌情使用預鋪0.2%明膠的培養瓶/培養皿,若細胞狀態好,可省略此步驟。
6.本細胞僅用于科學研究,不得用于臨床治療。
7.請注意無菌操作,避免污染。
293T,HEK-293T,人胚腎細胞
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