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南京江苑生物科技有限公司
南京江苑生物科技有限公司
| 產品規格 | 100 μg | 分類 | 其他 |
|---|---|---|---|
| 含量 | 99% | 級別 | 基準試劑 |
慢病毒包裝質粒Mix 江苑生物 江苑生物的慢病毒包裝質粒Mix（Packaging Mix）為優化的全套慢病毒包裝輔助質?；旌衔?，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝系統
產品簡介
江苑生物的慢病毒包裝質粒Mix（Packaging Mix）為優化的全套慢病毒包裝輔助質?；旌衔?，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝系統。本產品附贈表達eGFP蛋白的對照質粒（eGFP Control），用于驗證慢病毒包裝效果。本公司還提供慢病毒包裝試劑盒（江苑生物 JY03021），包含全套的包裝組分和試劑。
Packaging Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒的核心蛋白如基質蛋白、衣殼蛋白和核衣殼蛋白等；pol基因，編碼病毒復制所需的酶如反轉錄酶、整合酶和蛋白酶；rev基因，編碼調節gag和pol基因表達的調節因子；還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白。江苑生物的慢病毒包裝系統產生的慢病毒為“自啥"性病毒，即病毒感染目的細胞后不會再感染其他細胞，也不會利用宿主細胞產生新的病毒顆粒。慢病毒中的毒性基因已經被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。
本產品具有慢病毒包裝時間周期短（一周之內即可獲得純化好的高滴度慢病毒）和病毒滴度高的優勢，可應用于針對不同基因和藥物靶標的細胞學實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。為了加速科研進程，江苑生物還提供細胞基因過表達、shRNA/siRNA介導的基因沉默、CRISPR/Cas9介導的基因敲除等服務。
保存條件
干冰運輸。-20℃保存, 避免反復凍融，1年有效。
還需準備的其他實驗材料
1．被包裝的慢病毒載體質粒：在慢病毒包裝前，需要先獲得含有目的序列的慢病毒載體，以無內毒素高純度的試劑盒提取慢病毒載體質粒，并將質粒DNA溶于無菌的TE或ddH2O中，測定其濃度及純度，保證質粒DNA A260/A280在1.8-2.0之間。
2．慢病毒包裝用293T細胞株：良好的細胞狀態對病毒的包裝至關重要，避免細胞培養基有細菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數較少的細胞，如果細胞是剛復蘇的話，傳兩代之后再包裝。
3．細胞培養基，血清和雙抗等
4．質粒轉染試劑
5．其他常用實驗耗材（如10 cm培養皿，離心管等）
使用說明（以10 cm培養皿，為例）：
1．293T細胞分盤：轉染前一天，將293T細胞以合適的比例傳代到10 cm培養皿中，當細胞長到70%-90%時準備轉染。
注：細胞要充分消化，成團細胞影響轉染效率。
2．轉染前換液：轉染前將293T細胞換成新鮮培養基，10 mL/10 cm皿?，F在的轉染試劑例如Lipofectamine 2000、Lipofectamine 3000、LipoSuper（江苑生物 JY03051）和其他轉染試劑，多不受血清和抗生素的影響，此處可換為含有血清和抗生素的*培養基。具體需根據轉染試劑的要求換液。
注：293T細胞貼壁性不是很好，換液時應小心滴加盡量避免沖起細胞。
3．轉染：Packaging Mix：表達目的序列的慢病毒載體質粒=1：1
★ 以使用LipoSuper（江苑生物 JY03051）轉染試劑為例：
取一只無菌的離心管，加入750 μL DMEM（不含血清和抗生素），10 μg表達目的序列的慢病毒載體質粒（自行提供），和13.5 μL Packaging Mix（10 μg），用槍輕輕吹打混勻；再加入24 μL LipoSuper，用槍輕輕吹打混勻，靜置5 min，請特別注意不可Vortex或離心。將混合液均勻滴加到提前換液的細胞培養基中，輕輕晃勻，置于培養箱中培養，后續無需在數小時后更換培養液。
DMEM | 750 μL |
表達目的基因慢病毒載體質粒 (或者eGFP Control，作為對照) | 10 μg (eGFP Control 10 μg) |
Packaging Mix | 13.5 μL |
LipoSuper | 32 μL |
注：上述混合液室溫存放6 h內穩定。
某些細胞對轉染試劑比較敏感，可以在轉染后8-12小時更換細胞培養液，轉染效率無顯著影響。
★ 以使用Lipofectamine 3000（Invitrogen L3000015）轉染試劑為例：
取兩只無菌的離心管，一只加入500 μL Opti-MEM和32 μL Lipofectamine 3000，用槍輕輕吹打混勻；另一只加入500 μL Opti-MEM 和10 μg表達目的序列的慢病毒載體質粒（自行提供）、13.5 μL Packaging Mix（10 μg）及40 μL P3000試劑，用槍輕輕吹打混勻。將兩管液體混合，再次用槍輕輕吹打混勻，不可Vortex或離心，室溫孵育10-15 min。將混合液均勻滴加到提前換液的細胞培養基中，輕輕晃勻，置于培養箱中培養，后續無需在數小時后更換培養液。
1管 | Opti-MEM | 500 μL |
Lipofectamine 3000 | 32 μL | |
2管 | Opti-MEM | 500 μL |
表達目的基因慢病毒載體質粒 (或者eGFP Control，作為對照) | 10 μg (eGFP Control 10 μg) | |
Packaging Mix | 13.5 μL | |
P3000 | 40 μL |
注：某些細胞對轉染試劑比較敏感，可以在轉染后8-12小時更換細胞培養液。
Invitrogen的Protocol顯示10 cm培養皿Lipofectamine 3000推薦使用21.7 μL或者43.4 μL兩種劑量，自行探索哪個劑量更為合適。本實驗室在檢測該包裝質粒時，選用的劑量為32 μL
4．病毒收集：轉染36 h左右后，吸取上清至新的離心管中，4℃保存。另外添加10 mL新鮮的*培養基到細胞中，注意不要沖起細胞。再次大約36 h后，收取上清至同一個離心管中。將兩次收集的上清用0.45 μm濾器過濾后轉移到新的離心管中（若沒有0.45 μm濾器，將上清3000 rpm，4 ℃離心5 min，棄沉淀亦可）。此時上清液中的病毒顆粒可以直接檢測滴度或者感染目的細胞，如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可對上清液進行濃縮與純化。
注：如果使用濾器過濾，只能使用低蛋白結合力的纖維素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜，不能用硝酸纖維素膜（NC）。
5．（可選）慢病毒濃縮：可以使用江苑生物的慢病毒濃縮試劑盒（JY03011）進行慢病毒濃縮，效率更高。同時，也可以自行配制PEG-8000慢病毒濃縮液濃縮慢病毒。
注：慢病毒滴度測定方法參考（江苑生物→新聞中心）
6．病毒分裝與保存：將病毒上清或濃縮后的病毒分裝，保存于-80℃。
注：病毒液一定要分裝，切忌反復凍融，凍融一次病毒滴度將降低20-60%。
相關產品
產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 |
JY03011/JY03012 | 慢病毒濃縮試劑盒 | 50 mL/100 mL |
JY03013/JY03014 | PEG-8000慢病毒濃縮液 | 50 mL/100 mL |
JY03021/JY03022/JY03023 | 慢病毒包裝劑盒 | 10T/20T/40T (10cm dish) |
JY03024/JY03025/JY03026 | 慢病毒包裝質粒Mix | 100 μg/200 μg/400 μg |
JY03027/JY03028 | 慢病毒包裝質粒 pMD2.G | 1 μg/100 μg |
JY03029/JY03030 | 慢病毒包裝質粒 psPAX2 | 1 μg/100 μg |
JY03031/JY03032 | 慢病毒包裝質粒 pCMV-VSV-G | 1 μg/100 μg |
JY03033/JY03034 | 慢病毒包裝質粒 pCMV-dR8.91 | 1 μg/100 μg |
JY03035/JY03036 | 慢病毒包裝質粒 pMDLg/pRRE | 1 μg/100 μg |
JY03037/JY03038 | 慢病毒包裝質粒 pRSV-Rev | 1 μg/100 μg |
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