Cell Counting Kit-8，簡稱CCK-8試劑盒或CCK8試劑盒，是一種基于WST-8而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還 原生成橙黃色的 formazan(參考圖1)。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關系。

圖1. WST-8檢測原理圖 (EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑)

     WST-8是MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比具有一定的優(yōu)點。因為MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實驗結果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度高。
WST-8和WST-1相比，檢測靈敏度較高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。
本試劑盒可以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測。
   本試劑盒檢測比較便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無須再進行任何配制等操作。無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內完成。不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan。可以用于大批量樣品的檢測。
酚紅和血清對本試劑盒的測定無大影響。
WST-8對細胞幾乎無毒性。加入CCK-8溶液顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀板，使檢測時間更加靈活，便于找到合適的測定時間。
蘇州阿爾法生物還提供各種細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒可以比較和選擇
本試劑盒可以測定500個樣品。
包裝清單：

保存條件：
4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。
注意事項：
由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)問題。一方面，由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS、水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設法去除。用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。

使用說明：
1. 通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實驗需要，進行培養(yǎng)并給予0-10微升特定的藥物刺激。
2. 每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液，其它情況以此類推。可以用加了相應量細胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測，需設置加了相應量細胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。
3. 在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育0.5-4小時，對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。
4. 在450nm測定吸光度。如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片。可以使用大于600nm的波長，例如650nm，作為參考波長進行雙波長測定。
5. 將不同數(shù)量的HeLa細胞按照每孔100微升培養(yǎng)液接種到96孔板中，培養(yǎng)至細胞貼壁充分后，每孔加入10微升的CCK-8溶液孵育2小時后測定A450的檢測效果圖參考圖2。檢測效果僅供參考，實測數(shù)據(jù)會因檢測儀器等的不同而存在差異。

圖2. CCK-8試劑盒測定不同數(shù)量HeLa細胞的檢測效果圖。實測數(shù)據(jù)會因檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

常見問題：
1. CCK-8溶液對細胞的毒性大小如何？
CCK-8溶液對細胞的毒性非常低，通常觀察不到細胞毒性。細胞在CCK-8法檢測后仍然可以正常生長，并可以用于其它的細胞實驗。但為了避免CCK-8溶液可能帶來的對于后續(xù)檢測的影響，除非該細胞極難獲得，否則不推薦把CCK-8溶液孵育過的細胞用于其它實驗。
2. 如果吸光度值太低，可以采取什么辦法？
a. 適當增加細胞數(shù)量。
b. 延長加入CCK-8試劑后的孵育時間。
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