參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23527-2009測定蛋白酶活力，稍作修改。先將1%的酪蛋白溶液于40℃水浴5 min。加稀釋3.5倍的溶液0.5 mL，于40℃水浴2 min后，加1%的酪蛋白溶液0.5 mL，混勻，然后在40℃下水浴反應(yīng)10 min，結(jié)束后加入1.0 mL三。空白先加三再加酪蛋白。靜置10 min，12000 r/min離心5 min，取濾液30 μL，碳酸鈉溶液150 μL，福林酚試劑30 μL，40℃恒溫20 min，680 nm下于酶標(biāo)儀測吸光值。每個樣品做3次平行。

量取溶液48 mL，將超聲波發(fā)生儀的探頭置于溶液中，探頭沒過溶液2 cm，不接觸溶液底部。超聲參數(shù)：間歇比（s）3:3，超聲總時間5 min，超聲功率范圍（75~350 W），初始溫度控制為25℃。超聲預(yù)處理完畢后于4℃冰箱放置12 h，測其酶活、熱穩(wěn)定性、動力學(xué)、熱力學(xué)、熒光光譜、紫外光譜和紅外光譜。

由于反應(yīng)物酪蛋白減少量不易測定，因此用產(chǎn)物生成量的變化來反映水解過程

活性隨超聲功率的變化曲線如圖1所示。活性隨著超聲功率的增加出現(xiàn)波動現(xiàn)象。除了300 W和350 W時，其余超聲功率對活性提高都有顯著差異。其中在250 W時，活性，依次是125 W和175 W。酶活性比未超聲處理的酶活性依次提高26.9%，25.3%和22.2%。

注意：本次使用的超聲波細(xì)胞粉碎機為昆山超聲儀器有限公司生產(chǎn)的昆山舒美KBS-150數(shù)控超聲細(xì)胞粉碎機。