? 從細胞、組織和血液中全自動純化RNA
? 從拭子、血液和法醫樣本中全自動純化DNA
? 從細菌中純化質粒DNA
? 擴增反應產物中DNA的回收
? RT-PCR、PCR、測序反應和法醫檢測反應體系構建
BioRobot Universal System整合了高通量應用所需的所有儀器、軟件、純化技術和酶。Application Packs可用于基因表達、基因分型、測序、法醫、獸醫和藥物應用。全自動的優化方案可以純化高純度RNA、基因組DNA和質粒DNA并進行PCR產物回收。自動化的RT-PCR、PCR、測序和法醫檢測反應體系構建具有高可靠性和標準化水平,并且有助于消除因操作錯誤,特別是處理大量樣品而產生的偏差。
原理
基因表達應用
BioRobot Universal System配合Application Pack, Gene Expression使用,能夠對血液(收集在PAXgene Blood RNA Tubes中)、組織和細胞樣本進行96孔板RT-PCR反應體系構建和自動純化RNA。自動化的純化流程可從血液中純化高純度RNA具有高重復性。
BioRobot Universal System配合RNeasy 96 Universal Tissue 8000 Kit使用能夠從組織,包括裂解的脂肪和纖維組織中純化得到高品質RNA。
應用RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit可從細胞中純化得到RNA。純化流程的可靠性和效率已經過大范圍的起始板量的線性CT值驗證,線性范圍下至10個細胞,上至5 x 105個細胞。
基因分型應用
BioRobot Universal System配合Application Pack, Genotyping使用,能夠從口腔拭子或者人類全血中自動純化基因組DNA。可以使用全自動方案從至多192個口腔拭子樣本或96個人類全血樣本中純化高品質基因組DNA。自動化的純化流程能*消除所有污染物和酶抑制劑,純化得到的DNA可以立即應用于高通量的基因分型應用中。CT值具有高度的可重復性,證明了該純化方案的效率和可靠性。
自動化的PCR反應體系構建確保較高可靠性和標準化,并有助于消除因操作失誤,特別是處理大量樣品時產生的偏差。BioRobot Universal System可獲得高度重復性的CT值,沒有可檢測到的交叉污染(參見下表)。
在BioRobot Universal System上用自動化流程進行擴增反應體系設置。96孔板中柱以交替次序包含不含RNAse的純水(1、3、5、7、9和11)或4 ng模板DNA(2、4、6、8、10、12)。用QuantiTect Probe PCR Kit,和專為β-肌動蛋白基因設計的引物和探針進行real-time PCR,獲得CT值表示。X:在35個循環后,檢測不到信號。 無可檢測到的交叉感染 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A X 26.1 X 26.0 X 26.2 X 25.9 X 25.8 X 25.6 B X 26.2 X 26.4 X 26.1 X 26.2 X 25.9 X 26.0 C X 26.2 X 26.1 X 26.3 X 25.9 X 26.1 X 26.2 D X 26.5 X 26.4 X 26.1 X 26.0 X 26.2 X 26.4 E X 26.3 X 26.3 X 25.8 X 26.3 X 26.0 X 26.2 F X 26.1 X 26.1 X 26.3 X 26.3 X 25.8 X 25.9 G X 26.5 X 25.9 X 26.5 X 25.8 X 26.0 X 26.3 H X 26.2 X 26.0 X 26.3 X 25.8 X 26.0 X 25.7
測序
BioRobot Universal System配合Application Pack, Sequencing使用,能夠自動純化質粒DNA、回收DNA和進行測序反應體系構建。使用QIAprep 96 Turbo BioRobot Kit,每次可從至多4 x 96個E. coli培養物(1–5 ml)中純化得到分子生物學檢測級別的質粒DNA 。DNA產量具有高度重復性。
使用MinElute 96 UF PCR Purification Kit的全自動化方案每次可以從至多4 x 96個樣本中純化得到PCR產物(>100 bp)。PCR產物的回收率可與手動操作流程相當,證明了全自動方案的可靠性。
Investigator應用
BioRobot Universal System配合Application Pack, Investigator使用,能夠純化法醫學樣本中的總DNA,包括干血、表面拭子(例如,血液、、唾液和上皮細胞等)、面料上的污漬(例如,血液或者唾液污染的面料等)、煙頭、煙草、口香糖和信封。
使用經驗證的QIAamp 96技術可進行高效純化,并且純化得到的DNA在敏感下游應用中表現良好,如STR分析具有高。強大的純化程序使用QIAamp 96 DNA Swab BioRobot Kit,確保過程中的安全性,并有助于防止交叉污染。
Principle
BioRobot Universal System提供從不同類型樣本中純化高品質核酸的全自動純化方案。此外,該儀器以96孔板形式進行下游反應設置。通過自動化純化核酸和反應體系構建,BioRobot Universal System節省了手動操作時間,并且確保了高效、精簡的工作流程。
每個Application Pack都提供純化和下游反應體系構建。有4種Application Packs可用:
Application Pack, Gene Expression
Application Pack, Genotyping
Application Pack, Sequencing
Application Pack, Investigator
流程
BioRobot Universal System的自動化純化為簡單的結合、洗滌、洗脫過程。用戶選擇純化實驗方案,然后根據軟件指導的信息完成所需的余下步驟來設置儀器。每次純化的樣本數量取決于樣本類型和純化的分析物(參見下表)。
樣本通量/樣本類型 | 應用 | 每次純化的樣本 | 下游反應體系構建 |
血液(收集在PAXgene Blood | RNA純化 | 48或者96個樣本 | real-time RT-PCR;cRNA制備 |
細胞 | RNA純化 | 96的倍數,至多192個樣本 | real-time RT-PCR;cRNA制備 |
組織 | RNA純化 | 8的倍數,24–96個樣本 | real-time RT-PCR;cRNA制備 |
口腔拭子 | 基因組DNA純化 | 8的倍數,至多192個樣本 | real-time PCR:Quantifiler分析、 |
血液 | 基因組DNA純化 | 8的倍數,32–96個樣本 | real-time PCR |
法醫學樣本 | 基因組DNA純化 | 8的倍數,24–96個樣本 | Quantifiler分析、 |
E. coli培養物 | 質粒DNA純化 | 32–384個樣本(32倍數中32–96個樣本;96倍數中96–384個樣本) | 測序反應體系構建 |
擴增反應 | DNA產物回收 | 8–384個樣本(8倍數中8–96 個樣本;96倍數中 96–384個樣本) | – |
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應用
BioRobot Universal System適用于以96孔板形式進行中到高通量的實驗室應用,如:
? 基因表達分析
? 基因分型研究
? 測序
? 法醫應用
軟件
QIAsoft 5是BioRobot Universal System的控制系統,提供簡單的系統操作和可重復的樣本處理。詳細的上樣檢查,確保樣本、試劑和實驗室器具正確安裝,在工作臺設置過程中,有助于避免人為失誤。QIAsoft 5提供便捷的用戶管理,并可使用Checksum校驗不恰當的修改以保護報告與結果文檔。
QIAsoft 5同樣也滿足用戶對21 CFR Part 11的技術需求。此外,由QIAsoft 5使用或者生成的文件能夠用于實驗室信息管理系統(LIMS)進行便捷的數據管理與兼容。QIAsoft 5內的電子表格功能為制定的應用提供便捷的移液方案。