AF 594胺 等同于 Alexa Fluor 594 熒光染料中Alpha Fluor 594胺與AlexaFluor®594C5胺的分子相同。熒光染料胺是可用于向含有羰基的生物分子添加熒光標記的反應性分子。Alpha Fluor 594胺與羧酸，醛和酮反應。它是開發Alpha Fluor 594探針的非常有用的構建模塊。百螢生物為您提供優質的AF 594胺 等同于 Alexa Fluor 594 熒光染料。

操作方案

標記寡核苷酸

1.準備以下試劑：

200mMTHPTA [tris（3-羥丙基三唑基甲基）胺]水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴修飾的低聚水溶液（盡可能濃縮，例如> 10 mg / mL）

100 mM抗壞血酸鈉水溶液

10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網站）

2.在反應前將CuSO4與THPTA以1：2的比例混合并充分渦旋幾分鐘。該溶液在冷凍時可穩定數周。

3.向炔烴改性的低聚物溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為2-5當量）。

4.加入5當量的THPTA / CuSO4工作溶液（來自步驟1）。

5.加入10-30當量的抗壞血酸鈉。

6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應混合物30-60分鐘。

7.乙醇通過所需方法（例如HPLC）沉淀或純化寡聚物。

標記肽

1.準備以下試劑：

200 mM THPTA配體水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴修飾肽水溶液或DMF溶液（取決于您的肽溶解度，如果可能，> 10 mg / mL）

100 mM抗壞血酸鈉水溶液

10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網站）

2.在反應前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時可穩定數周。

3.向炔烴修飾的肽溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當量）。

4.加入5-10當量的THPTA / CuSO4。

5.加入10-20當量的抗壞血酸鈉。

6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應混合物30-60分鐘。

7.通過HPLC純化您想要的肽。

標記炔烴有機小分子

1.準備以下試劑：

200 mM THPTA配體水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴化合物水溶液或DMF溶液（取決于您的化合物溶解度，如果可能，> 10mg / mL，）

100 mM抗壞血酸鈉水溶液

10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網站）。

2.在反應前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。當冷凍時，該溶液可穩定數周。

3.向炔烴溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當量）。

4.加入25當量的THPTA / CuSO4。

5.加入50當量的抗壞血酸鈉。

6.在室溫下攪拌反應混合物30-60分鐘。

7.通過色譜或其他方法純化您想要的分子。

標記生物聚合物

1.準備以下試劑：

200 mM THPTA配體水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴改性的水中生物聚合物（盡可能濃縮，例如> 5毫克/毫升）

100 mM抗壞血酸鈉水溶液

10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網站）。

2.在反應前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時可穩定數周。

3.向炔烴改性的生物聚合物溶液中加入過量的染料疊氮化物（負載比：5-20染料疊氮化物/炔烴）。

4.加入5摩爾當量（參考染料疊氮化物）的THPTA / CuSO 4。

5.加入10當量的抗壞血酸鈉（參見染料疊氮化物）。

6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應混合物30-60分鐘。

7.通過凝膠過濾或透析純化您想要的分子。

標記細胞，細胞裂解物或生物樣品

1.準備以下試劑：

水性緩沖液或100mM THPTA配體水溶液

20mM CuSO4水溶液

300mM抗壞血酸鈉水溶液

2.5mM炔烴或疊氮化物標記試劑水溶液或DMSO溶液

2.對于每個疊氮化物或炔烴修飾的細胞或細胞裂解物樣品，將以下試劑加入1.5 mL微量離心管中，然后短暫渦旋混合。

50μL細胞或細胞裂解液樣品

50μLPBS緩沖液

50μL5mM相應的染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（或染料炔烴）檢測試劑

3.加入10μL100mM THPTA溶液，短暫渦旋混合。

4.加入10μL20mM CuSO4溶液，短暫渦旋振蕩。

5.加入10μL300mM抗壞血酸鈉溶液以引發點擊反應，短暫渦旋混合。

6.保護點擊反應不受光照，使其在室溫下孵育30分鐘。

7.點擊標記細胞或細胞裂解物并準備用于下游處理和/或分析。