MycoLight 熒光CTC活細菌定量試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于檢測細菌的試劑盒，CTC流式細胞術活菌分析試劑盒提供了一種簡便的方法，可根據呼吸活動評估細菌的健康和活力。 CTC本身是非熒光的，一旦被活細菌細胞表面的電子轉移系統還原，就會形成紅色和不溶性熒光CTC甲maz，可以用流式細胞儀檢測到。 不能呼吸的死細菌或以較低頻率呼吸的不健康細菌將不產生或產生很少的帶有CTC染色的紅色熒光，因此可對細菌種群的健康狀況進行半定量測量。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的MycoLight 熒光CTC活細菌定量試劑盒。

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備10倍染料儲備液
2.準備細菌樣本
3.將細菌樣品與CTC在37°C孵育30分鐘
4.PE-Texas Red通道通過流式細胞儀分析樣品

溶液配制

1.儲備溶液配制

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環。
1. CTC儲備溶液（10倍）：
將1 mL蒸餾水加到CTC（組分A）小瓶中，制成10X儲備液。 注意：原液在-20°C穩定2周。 避光。

操作步驟

1.準備細菌樣品，濃度為106細胞/ ml。在適當的培養基中使細菌生長到對數后期。通過以10,000 x g離心10分鐘除去培養基，然后將沉淀重懸于適量的PBS中。注意：在波長= 600 nm（OD600）處測量細菌培養物的光密度，以確定細胞數。對于大腸桿菌培養，OD600 = 1.0等于8 x 108細胞/ ml。

2.根據需要用測試化合物處理細胞。通過以10,000 x g離心10分鐘來去除處理液，然后將沉淀物重新懸浮在適量的測定緩沖液（組分B）中，以使處理后樣品中的細菌濃度與活菌濃度相同。注意：開始治療之前，請確定細菌培養物的濃度。注意：死細菌可以作為陰性對照。建議用70％乙醇殺死細菌30分鐘，然后煮沸60分鐘。

3.將10 µL 10X CTC儲備溶液加到90 µL細菌樣品中。

4.充分混合，然后在黑暗中于37°C孵育30分鐘。

5.在使用流式細胞儀分析細胞之前，添加400 µL分析緩沖液（組分B）以增加體積。

6.用流式細胞儀通過PE-Taxes Red通道（Ex / Em = 488/615 nm）監測細菌的熒光。注意：要排除雜物，建議將流式細胞儀的閾值設置為以下值：FSC> 10,000，SSC> 5,000。注意：CTC的效率高度依賴菌株，因此會相應優化染色條件。