使用LysoBrite 染料的分析方案

概述

準備細胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分鐘

洗滌細胞

在熒光顯微鏡下分析

注：該方案僅提供指南，應根據您的具體需求進行修改。

操作方法

1.制備溶酶體染色溶液：

1.1解凍 LysoBrite 染料至室溫。

1.2通過將20μL的500 X LysoBrite 染料稀釋到10 mL Hanks和20 mm Hepes緩沖液或緩沖液（HBSS）中，制備染料工作溶液。

注1：對于一個96孔板，20μL的LysoBrite 染料就足夠了。 在<-15℃下等分并儲存未使用的LysoBrite 染料儲備溶液。 保護它免受光照，避免反復凍融循環。

注2：熒光溶酶體指示劑的濃度根據具體應用而變化。 可以根據特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1貼壁細胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。 b.將細胞在37℃，5％CO2培養箱中孵育30分鐘。 c.用預熱（37℃）Hanks和20mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液洗滌細胞兩次，用HBSS或生長培養基填充細胞孔。 d.使用配有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：a.將等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）加入細胞中。將細胞在37℃，5％CO2培養箱中孵育30分鐘。 b.用預熱（37℃）Hanks和20mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液洗滌細胞兩次，用HBSS或生長培養基填充細胞孔。 c.使用配備有所需過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。