Cell Meter 細(xì)胞自噬檢測熒光成像試劑盒 自噬是動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)大分子降解的主要途徑之一。 自噬過程涉及將細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器隔離在稱為自噬體的膜結(jié)合液泡中，將自噬體與溶酶體融合，然后降解被隔離的物質(zhì)。該試劑盒采用Autophagy Super Blue 作為特異性自噬標(biāo)記物來分析自噬活性。 該測定法經(jīng)過優(yōu)化，可直接檢測分離和粘附細(xì)胞中的自噬。該試劑盒針對熒光顯微鏡進(jìn)行了優(yōu)化。 它提供了比其他市售自噬探針高的選擇性。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Cell Meter 細(xì)胞自噬檢測熒光成像試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.用您的測試化合物以1-2×104個(gè)細(xì)胞/孔的密度制備細(xì)胞
2.添加自噬Super Blue 工作溶液
3.在37°C孵育15-60分鐘
4.用洗滌緩沖液洗滌細(xì)胞
5.使用DAPI濾光片組檢測在Ex / Em = 330/520 nm（截止= 475 nm）處的熒光

溶液配制

工作溶液配制

將20μL500X自噬Super Blue （組分A）添加到10 mL染色緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成Autophagy Super Blue 工作溶液，避光。 注意：20μL500X自噬Super Blue （組分A）足以容納一個(gè)96孔板。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.根據(jù)您的特定誘導(dǎo)方案將細(xì)胞培養(yǎng)至適合自噬誘導(dǎo)的密度（約1-2×104細(xì)胞/孔/ 96孔板）。同時(shí)，在每種標(biāo)記條件下，以與誘導(dǎo)種群相同的密度培養(yǎng)非誘導(dǎo)的陰性對照細(xì)胞種群。

2.除去培養(yǎng)基。

3.在每孔中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的自噬Super Blue 工作溶液。

4.將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15至60分鐘。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。

5.用洗滌緩沖液（組分C）洗滌細(xì)胞3-4次，然后向每個(gè)孔中添加100 µL洗滌緩沖液（組分C）。注意：建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間，使染料在細(xì)胞未充分染色的情況下積累。

6.用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 330/520 nm（Cutoff = 475 nm）上檢測熒光強(qiáng)度，或使用帶有DAPI濾光片組的熒光顯微鏡。

圖示

圖1.通過自噬在HeLa細(xì)胞中誘導(dǎo)自噬Super Blue 標(biāo)記的囊泡。 將HeLa細(xì)胞在常規(guī)DMEM培養(yǎng)基（左：對照）中或在含5％血清的1X HBSS緩沖液中（右：自噬處理）孵育16小時(shí)。對照細(xì)胞和處理過的細(xì)胞均在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中與Autophagy Super Blue 工作溶液一起孵育20分鐘，并用洗滌緩沖液洗滌3次。 立即在帶有DAPI通道（藍(lán)色）的熒光顯微鏡下對細(xì)胞成像。 細(xì)胞核用Nuclear Gree LCS1（綠色）染色。