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Spexyte 細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液試劑盒 細(xì)胞內(nèi)pH（pHi）在許多細(xì)胞事件中起著重要的調(diào)節(jié)作用，包括細(xì)胞體積調(diào)節(jié)，細(xì)胞代謝，鈣調(diào)節(jié)，受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，離子轉(zhuǎn)運(yùn)，內(nèi)吞作用和其他細(xì)胞過(guò)程。胞漿中的細(xì)胞內(nèi)pH通常為6.8?7.4，酸性細(xì)胞器中的pH為4.5?6.0。細(xì)胞內(nèi)pH變化具有顯著的生理學(xué)作用，例如，細(xì)胞內(nèi)信使例如Ca 2+和cAMP的pH依賴性濃度影響細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)。最近的幾篇報(bào)道表明，pH失調(diào)正在成為癌細(xì)胞的標(biāo)志。該提供了一系列帶有尼日爾霉素的pH校準(zhǔn)緩沖液（pH 4.5?8.0），在100–150 mM K +的存在下，它們可通過(guò)外部pH調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)pH。當(dāng)與pH指示劑（例如BCFL，AM或BCECF，AM）結(jié)合使用時(shí)，Spexyte 細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液試劑盒可創(chuàng)建用于確定細(xì)胞內(nèi)pH的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

適用儀器

熒光顯微鏡
Ex:	Texas Red/FITC 濾波片組
Em：	Texas Red/FITC 濾波片組
推薦孔板:	黑色透明底板

熒光酶標(biāo)儀
Ex:	440, 500 nm
Em：	530 nm
Cutoff：	515 nm
推薦孔板:	黑色透明底板

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.帶有pH指示劑的染色細(xì)胞（例如：BCFL，AM）
2.用HH緩沖液洗滌細(xì)胞
3.準(zhǔn)備細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液
4.向細(xì)胞添加細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液
5.在37°C孵育10分鐘
6.使用適當(dāng)?shù)腅x / Em過(guò)濾器分析細(xì)胞

溶液配制

1.儲(chǔ)備溶液的制備

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Nigericin儲(chǔ)備溶液（10 mM）：
將276 µL DMSO（組分J）添加到小瓶尼日爾霉素（組分I）中，制成10 mM Nigericin儲(chǔ)備溶液。

2.工作溶液的制備

將1 µL 10mM Nigericin儲(chǔ)備溶液添加到1 mL標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖液（組分A至組分H）中，制成細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液。

點(diǎn)擊查看樣品制備方案

樣品示例及操作

這是使用BCFL，AM pH指示劑校準(zhǔn)細(xì)胞內(nèi)pH的樣品實(shí)驗(yàn)方案。

1.用BCFL，AM染色細(xì)胞：

1.1在DMSO溶液中制備5 mM BCFL，AM（Cat＃21190）。
1.2在HH緩沖液+ 0.02％PF127（Cat＃20053）中稀釋至5 µM。
1.3從細(xì)胞中去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
1.4加入100 µL BCFL，AM染色液。
1.5在37°C下孵育30分鐘。
1.6去除BCFL，AM染色溶液，并用HH Buffer洗滌一次。
1.7清空每個(gè)孔。

2.制作細(xì)胞內(nèi)pH標(biāo)準(zhǔn)曲線：

2.1向細(xì)胞中添加100 µL細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液。
2.2在37°C下孵育5-10分鐘。
2.3使用適當(dāng)?shù)腅x / Em過(guò)濾器分析細(xì)胞。例如：BCFL，AM：Ex = 440、500nm，Em = 530nm。

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