操作步驟

1.準備HHBS緩沖液和10％Pluronic®F-127溶液。

2.在高質量無水DMSO中制備2 mM至20 mM BCECF，AM原液。
2.1使用的BCECF，AM的量：1毫克
2.2所需濃度：2 mM
2.3在合適的容器中，將1mg BCECF，AM與618.28μL無水DMSO混合。

3.使用10μMBCECF，AM 3在HHBS中制備2X工作溶液和0.08％Pluronic®F-127。
3.1終孔內濃度為BCECF，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的終孔內濃度：0.04％
3.3在合適的容器中混合16μLBCECF，AM和25.6μL10％Pluronic F-127。然后，添加HHBS或您的緩沖區
選擇直到體積為3.2 mL。
注意：對于大多數細胞系，我們建議終濃度為BCECF，AM為4至5μM。
注意：推薦的Pluronic F-127每孔濃度終為0.02％至0.04％。

4.將100μL染料工作溶液加入已經含有100μL培養基的所需孔中。
4.1該步驟將染料工作溶液從2X稀釋至1X，并將每種組分的終濃度調節至以下：5μMBCECF，AM，0.04％Pluronic®F-127

5.孵育染料
5.1將染料加載板在細胞培養箱中孵育30-60分鐘。
5.2將染料加載板在室溫下孵育30分鐘。

6.準備HHBS緩沖液（或您選擇的緩沖液）。
6.1在合適的容器中加入HHBS或您選擇的緩沖液，直至體積為4 mL。

7.用HHBS緩沖液或您選擇的緩沖液替換染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，從所需孔中除去200μL染料工作溶液和培養基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙*舒的HHBS（或您選擇的緩沖液）。

8.運行實驗
8.1為您的樣品添加所需的處理。
8.2以Ex / Em = 503/528 nm運行實驗。