鈣離子熒光探針Fluo-3FF, AM是美國AAT生產的用于鈣通量測定的試劑，鈣通量測定是用于篩選G蛋白偶聯受體（GPCR）的藥物發現中的優選方法。 我們的Quest Fluo-8 和Rhod-4 系列鈣檢測試劑是亮的綠色和紅色鈣指示劑。 我們的其他鈣指標如Fluo-3，Fura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM也具有與市場上相比高的質量。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商，為您提供優質的鈣離子熒光探針Fluo-3FF, AM。

實驗方案

儲備溶液配制

在高質量無水DMSO制備2至5 mM 的Fluo-3 AM中儲備溶液。

工作溶液配制

Fluo-3 AM工作溶液
1.在實驗當天，將Fluo-3AM溶解在DMSO中，或將指示劑儲備溶液的等分試樣解凍至室溫。

2.在含有0.04%Pluronic®F-127的緩沖液（例如Hanks和Hepes緩沖液）中制備2至20µM Fluo-3 AM工作溶液。對于大多數細胞系，建議使用最終濃度為4-5μM的Fluo-3 AM。細胞負載所需指示劑的確切濃度請根據經驗確定。

注：非離子洗滌劑Pluronic F-127用于提高Fluo-3 AM的水溶性。可從百螢購買各種Pluronic F-127溶液。
注：如果你的細胞含有有機陰離子轉運蛋白，可以將丙H舒（1-2mM）添加到染料工作溶液中（最終井內濃度為0.5-1mM），以減少酯化指示劑的泄漏。多種形式的丙H舒產品，包括水溶性、鈉鹽和穩定溶液，可從百螢購買。

操作步驟

以下是我們推薦的將AM酯加載到活細胞中的方案。本方案僅提供指南，實際應根據您的具體需求進行修改。

1.在生長培養基中培養細胞過夜。
2.第二天，將1X Fluo-3 AM工作溶液添加到孔板中。
注意：如果你的化合物干擾血清，在染色前用新鮮的HHBS緩沖液代替生長培養基。
3.將加入染料的孔板在37°C的細胞培養箱中培養30至60分鐘。
注：將染料培養2小時以上可以提高某些細胞系的信號強度。
4.用HHBS或您選擇的緩沖液（含有陰離子轉運蛋白抑制劑，如1mM丙H舒）代替染料工作溶液，以去除任何多余的探針。
5.根據需要添加刺激物，并同時使用配備有FITC濾波片組的熒光顯微鏡或包含可編程液體處理系統（如FDSS、FLIPR或FlexStation）的熒光酶標儀在490/525nm，Cutoff=515nm處檢測熒光強度。

圖示

將U2OS細胞以40,000個細胞/100μL/孔接種過夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。 除去生長培養基，將細胞分別與100μLFluo-3 AM，Fluo-4 AM和Fluo-8 AM在HHBS中以4μM濃度在37℃，5％CO 2中溫育。 孵化器1小時。 用200μLHHBS洗滌細胞兩次，然后使用FITC通道用熒光顯微鏡（Olympus IX71）成像。