實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1. 準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)細(xì)胞

2. 溶液配制

3. 在室溫或37℃下將染料與細(xì)胞一起孵育15至30分鐘

4. 去除染料中的工作溶液

5. 使用流式細(xì)胞儀分析（Ex / Em = 490/520 nm-FITC濾波器）

溶液配制

儲備溶液配制

CytoTrace Ultra Green原液（2-10 mM）：添加適量的DMSO充分混合以制成CytoTrace Ultra Green原液（2-10 mM）。注意：儲備溶液應(yīng)立即使用；所有剩余的溶液應(yīng)等分，并在<-20 o C下冷凍。避免重復(fù)凍融循環(huán)，并避光。

工作溶液配制

CytoTrace Ultra Green工作溶液：通過用Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或自備的pH=7的緩沖液稀釋DMSO儲備液，制備0.5至5 µM的染料工作液，并離心。注意：在某些細(xì)胞類型，可能需要較低的濃度才能染色細(xì)胞。我們建議在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前針對每種細(xì)胞類型進(jìn)行測試以獲得佳濃度使實(shí)驗(yàn)更順利。

操作步驟

1. 用測試化合物處理細(xì)胞。
   
   

2. 離心細(xì)胞以獲得每管2-10×10 5個(gè)細(xì)胞。
   
   

3. 將細(xì)胞重懸于500 µL CytoTrace Ultra Green工作溶液中。
   
   

4. 在室溫或37°C下，將細(xì)胞與染料溶液孵育15至30分鐘，避光。
   
   

5. 從細(xì)胞中除去染料工作溶液；可選：4％甲醛固定細(xì)胞。
   
   

6. 用HHBS或自備的緩沖液洗滌細(xì)胞一次。
   
   

7. 將細(xì)胞重懸于500 µL預(yù)熱的HHBS或培養(yǎng)基中，每管可得到2-10×10 5個(gè)細(xì)胞。
   
   

8. 使用流式細(xì)胞儀或帶有FITC濾波片組的熒光顯微鏡檢測Ex / Em = 490/520 nm處的熒光變化。