操作步驟

準備2-10 mMDMSO儲備溶液

對于＃22014添加45微升DMSO成50 μ 克小瓶使2mM的儲備溶液（1毫克/毫升，相當于1.8毫摩爾）;

對于＃22015添加36微升DMSO成50 μ 克小瓶制成10mM儲備溶液（1毫克/毫升，相當于1.46毫摩爾）;

對于＃22016，加入153μLDMSO以制備10mM儲備溶液（1mg / ml相當于1.53mM）;

對于＃22017，加入215uL ml DMSO以制備10mM儲備溶液（1mg / ml相當于2.15mM）;

對于＃22020，將4.2mg溶于1ml DMSO中以制備10mM儲備溶液（1mg / ml相當于~2.4mM）;

注意：應及時使用原液; 任何剩余的溶液應等分并在< -20 o C冷凍。避免反復凍融循環，避免光照。

準備染料工作溶液

在使用之前，通過用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH7）稀釋來自步驟1的DMSO儲備溶液，制備1至20μM染料工作溶液。通過渦旋混合均勻。

用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞：

3.1用測試化合物處理細胞一段所需的時間。

3.2離心細胞，每管2-10×10 5個細胞。

3.3將細胞重懸于500μL 染料工作溶液中（來自步驟2）。

3.4在室溫或37° C 下用染料溶液孵育細胞15至30分鐘，避光。

3.5從細胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液清洗細胞。將細胞重懸于500μL預熱的HHBS或培養基中，得到每管2-10×10 5個細胞。

3.6使用流式細胞儀（FL1通道） 或熒光顯微鏡監測Ex / Em = 490 / 520nm處的熒光變化。

注意：對于細菌細胞染色：當通過測試細菌過夜生長預處理的營養肉湯中1：800稀釋儲備溶液時，染色是有效的，但也可以使用新鮮牛肉膏或PBS。細菌懸浮液應用PBS稀釋至每毫升10 5 -10 7個生物。可以通過將1ml溶液施加到.45μm過濾器（25mm）并真空過濾除去溶液，然后加入1ml染料溶液并在室溫下孵育5-10分鐘來染色細菌