樣品實驗方案

簡要概述

1. 用5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備含測試化合物的細(xì)胞

2. 將5 µL 200X Thiolite Green加入1 mL細(xì)胞溶液中

3. 將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15至30分鐘

4. 沉淀細(xì)胞并將細(xì)胞重懸于1 mL生長培養(yǎng)基中

5. 使用帶有FL1通道的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

溶液配制

儲存溶液配制

1. Thiolite 綠色原液（200X）：將500µL DMSO（組分C）加入小瓶Thiolite Green（組分A）中并充分混合，制成200X Thiolite Green儲備液，避光。

實驗步驟

1.對于每個樣品，在1 mL溫?zé)崤囵B(yǎng)基或自備緩沖液中以5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備細(xì)胞。注意：應(yīng)單獨評估每種細(xì)胞系，以確定誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞密度。

2.用測試化合物處理細(xì)胞所需的時間以誘導(dǎo)凋亡。

3.向處理過的細(xì)胞中加入5µL 200X Thiolite Green儲備溶液。

4.將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15至30分鐘。注意：對于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并在與Thiolite Green染料上樣溶液孵育之前，用含血清的培養(yǎng)基清洗細(xì)胞一次。合適的孵育時間取決于所用的單個細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。

5.可選：將細(xì)胞以1000 rpm離心4分鐘，然后將細(xì)胞重懸于1 mL的測定緩沖液（組分B）或自備緩沖液中。

6.使用帶有FL1通道的流式細(xì)胞儀（Ex / Em = 490/525 nm）檢測熒光強度。