適用儀器

樣品實驗方案

簡要概述

準備并添加葡萄糖標準品和/或測試樣品（50μL）
準備并添加葡萄糖分析工作溶液（50μL）
在37°C孵育10-30分鐘
在Ex / Em = 540 / 590nm處檢測熒光強度

溶液配制

1.儲備溶液配制

       除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環。
1.1Amplite 紅色儲備液（250X）：
將100μLDMSO（組分E）加入到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中。應立即使用原液。任何剩余的溶液應等分并在-20℃重新冷凍。注意：避免反復凍融循環。注意：在硫醇如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰基*醇存在下，Amplite Red底物不穩定。反應中DTT或2-巰基*醇的濃度應不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩定。因此，反應應在pH 7-8下進行。建議使用提供的分析緩沖液（pH 7.4）。

1.2辣根過氧化物酶（HRP）儲備液（10 U / mL）：
將1mL測定緩沖液（組分B）加入到辣根過氧化物酶（組分C）的小瓶中。注意：未使用的HRP溶液應分為單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

1.3葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL）：
將1mL測定緩沖液（組分B）加入葡萄糖氧化酶（組分D）的小瓶中。注意：未使用的葡萄糖氧化酶溶液應分為一次性等分試樣并儲存在-20℃。

1.4葡萄糖原液（800mM）：
將1mL測定緩沖液（組分B）加入葡萄糖小瓶（組分F）中。注意：未使用的葡萄糖溶液應分為單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

2.標準溶液配制

2.1葡萄糖標準溶液配制
通過將適量的800mM葡萄糖儲備溶液稀釋到測定緩沖液（組分B）中來制備葡萄糖標準品，以產生30μM的葡萄糖濃度。 然后在測定緩沖液（組分B）中進行1：3連續稀釋，得到約10,3,1,0.3,0.1和0.03μM連續稀釋的葡萄糖標準品。 包括非葡萄糖緩沖液對照作為空白對照。

3.工作溶液配制

表1.一個透明底96孔微孔板的分析工作溶液（2X）