操作方法

1.準(zhǔn)備尼羅紅工作溶液：

1.1在高質(zhì)量無水DMSO中制備1 mM尼羅紅原液。應(yīng)及時使用原液; 任何剩余的溶液應(yīng)等分并在<-20 o C 冷凍。

注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)，避免光照。

1.2在使用前，在Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH7）中稀釋Nile Red DMSO儲備溶液（來自步驟1.1），制備200至1000 nM 1X 尼羅紅的工作溶液。將它們混合均勻通過votexing。

2.用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀運(yùn)行尼羅河紅：

2.1用測試化合物處理細(xì)胞一段所需的時間。

2.2離心細(xì)胞，每管加入1-5×10 5個細(xì)胞。

2.3將細(xì)胞重懸于500μL 尼羅紅工作溶液中（來自步驟1.2）。

2.4在室溫或37° C 孵育 5至10分鐘，避光。

2.5要從細(xì)胞中取出尼羅紅工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液清洗細(xì)胞。將細(xì)胞重懸于500μL預(yù)熱的HHBS或培養(yǎng)基中，每管獲得1-5×10 5個細(xì)胞。

2.6用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀監(jiān)測Ex / Em = 552/636 nm處的熒光變化。

注1：對于粘附細(xì)胞，細(xì)胞可用HHBS或您選擇的緩沖液洗滌，并直接在細(xì)胞板中加載Nile Red 工作溶液。

注2：細(xì)胞也可以加前綴，然后用尼羅紅工作溶液染色。