樣品實驗方案

簡要概述

1.準備ALT工作溶液（50 µL）
2.加入ALT標準液或測試樣品（50 µL）
3.在37°C下孵育30分鐘至60分鐘
4.監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm時的熒光增加

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環(huán)。
1.1 ALT標準溶液：
將100 µL DPBS加到ALT陽性對照（成分D）的小瓶中，制成100 U / mL ALT儲備液。

2.標準溶液

ALT標準
將10 µL 100 U / mL ALT標準溶液加到含0.1％BSA的990 µL DPBS緩沖液中，以生成1000 mU / mL ALT標準溶液（ALT7）。 取1000 mU / mL ALT標準溶液并進行1：3連續(xù)稀釋，以得到ALT標準品（ALT6-ALT1）的連續(xù)稀釋液。

3.工作溶液

3.1 NAD解決方案（100X）：
將100 µL ddH2O加入NAD小瓶（組分C）。

3.2 ALT酶混合物溶液：
將10 mL ALT分析緩沖液（組分B）添加到ALT酶混合物（組分A）瓶中，并充分混合。

3.3 ALT工作溶液：
將整個小瓶100X NAD溶液（從1）添加到ALT酶混合物溶液（從2）中，以得到ALT工作溶液。

注意：此ALT工作溶液足以容納兩個96孔板。 它在室溫下不穩(wěn)定，應(yīng)在2小時內(nèi)及時使用，并避免暴露在光線下。或者，可以通過將200μLH2O加入組分A的瓶子中制成50倍的ALT酶混合物儲備溶液，然后通過將儲備溶液與測定緩沖液（組分B）和100x NAD溶液按比例混合來制備ALT工作溶液。