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當(dāng)前位置:西安百螢生物科技有限公司>>trFluor™ 染料和試劑盒>>檢測試劑盒>> 13801Amplite比色法天門冬an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒

Amplite比色法天門冬an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒

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產(chǎn)品型號13801

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所  在  地西安市

更新時(shí)間:2024-01-30 12:43:16瀏覽次數(shù):176次

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Amplite比色法天門冬an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒 是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測AST的試劑盒

Amplite比色法天門冬an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒 是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測AST的試劑盒,天冬*酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST),也稱為血清*草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT),是轉(zhuǎn)移酶家族的成員。它催化天冬*酸和*之間α-氨基的可逆轉(zhuǎn)移,是氨基酸代謝中的重要酶。AST存在于許多身體組織中,例如肝臟,心臟,肌肉,腎臟,腦。在健康受試者中,血清AST水平低。然而,當(dāng)細(xì)胞受損時(shí),例如急性和慢性肝炎,阻塞性黃疸,肝癌,心肌梗塞,AST可能會滲入血流并且AST水平顯著升高。因此,血清AST水平的測定具有重要的臨床和診斷意義。

Amplite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測試劑盒為各種生物樣品中AST的測量提供了一種快速而靈敏的方法。 天冬*酸轉(zhuǎn)*酶催化天冬氨酸和α-酮戊二酸與草酰乙酸和*的反應(yīng):

天冬*酸(Asp)+α-酮戊二酸=草酰乙酸+*(Glu)

通過酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來測量產(chǎn)物L(fēng)-*。可以通過熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm(Ex / Em = 540nm / 590nm)下讀取信號。使用Amplite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒,我們在100μL反應(yīng)體積中檢測到低至2 mU / mL的AST。該測定是穩(wěn)定的,并且可以容易地適用于各種各樣的應(yīng)用。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供的Amplite比色法天門冬an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒

實(shí)驗(yàn)方案

96孔板測定示例

概述

準(zhǔn)備AST反應(yīng)混合物(50μL)

加入AST標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品(50μL)

孵育于37℃,20-30分鐘或室溫,60分鐘

在Ex / Em = 540 / 590nm處監(jiān)測熒光增加

注意:在開始實(shí)驗(yàn)之前,在室溫下解凍組分A和B各一瓶。

操作方法

1.準(zhǔn)備AST標(biāo)準(zhǔn)品的連續(xù)稀釋液(1至300 mU / mL):

1.1向DPBS緩沖液中加入所需量的AST陽性對照,制成100 U / mL AST標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意:未使用的AST陽性對照(組分D)應(yīng)存儲在4℃。 不要凍結(jié)。

1.2將3μL100U / mL AST標(biāo)準(zhǔn)溶液(來自步驟1.1)加入含0.1%BSA的997 L DPBS緩沖液中,得到300 mU / mL AST標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3取300μL300mU / mL AST標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1:3連續(xù)稀釋,得到AST標(biāo)準(zhǔn)品的100,30,10,3,1,0.3和0 mU / mL系列稀釋液。

1.4如說明書中的表1和2中所述,將AST標(biāo)準(zhǔn)品和含有AST的測試樣品的系列稀釋液加入到實(shí)心黑色96孔微量培養(yǎng)板中。

注意:如果需要,將測試樣品稀釋至含有0.1%BSA的DPBS緩沖液中的濃度范圍。

2.準(zhǔn)備AST測定混合物:

2.1將100μLDdH2O加入到NAD小瓶(組分C)中,得到100X NAD溶液。

2.2將10 mL AST測定緩沖液(組分B)加入AST Enzyme Mixture瓶中(組分A),并充分混合。

2.3將整瓶100X NAD溶液(來自步驟2.1)加入到AST Enzyme Mixture溶液中(來自Step2.2)使用AST測定混合物。

注意1:該AST測定混合物足以用于兩個(gè)96孔板。 在室溫下不穩(wěn)定,應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)及時(shí)使用,避免暴露在光線下。

注意2:或者,可以通過向組分A的瓶中加入200μLH2O制備50倍的AST酶混合物原液,然后通過將原液與測定緩沖液(組分B)和100x NAD混合制備AST測定混合物。 按比例解決。 將未使用的50X AST Enzyme Mixture儲備液和100X NAD溶液分裝并儲存在-20℃,避免凍融循環(huán)。

3.運(yùn)行AST測定:

3.1將50μL的AST測定混合物(來自步驟2.3)加入AST標(biāo)準(zhǔn)品,空白對照和測試樣品的每個(gè)孔中(參見步驟1.4),使得總AST測定體積為100μL/孔。

注意:對于384孔板,每孔加入25μL樣品和25μLAST測定混合物。

3.2將反應(yīng)在37°C下孵育20-30分鐘或在室溫下孵育60分鐘,避光。

注意:空白控制的背景隨著時(shí)間和溫度的增加而增加。 如果在37℃下孵育30分鐘,背景將很高。

3.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的熒光板讀數(shù)器監(jiān)測熒光增加(佳Ex / Em = 540 / 590nm,在570nm處截止)。







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