胱天蛋白酶Caspase 9熒光底物Ac-LEHD-AMC 藍是美國AAT Bioquest生產的熒光底物，Caspase 9是半胱*酸蛋白酶家族中CED-3亞家族成員，在凋亡起始階段占有必要地位。這些酶主要具有特異的保守性區域，并特異的切開識別位點后面的天冬氨酸殘基。起始凋亡蛋白酶（例如caspases-8）效應蛋白酶，例如caspase-3或者-7。這些效應蛋白酶然后酶切細胞底物導致凋亡的形態學改變。AC-LHED-AMC是caspase-9選擇性熒光底物。Caspase-9酶切水解特異性底物AC-LHED-AMC，導致釋放AMC熒光集團，其激發波長是365nm,發射光波長為450nm。這個實驗的準備試驗緩沖液包含50nM MES，pH6.5,10%PEG8000, 0.1% CHAPS, 5 mM DTT, and 1 mM EDTA.。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的胱天蛋白酶Caspase 9熒光底物Ac-LEHD-AMC 藍。

樣品實驗方案

以下說明書僅提供指南，實際應根據您的具體需求進行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase測定

1.1在DMSO中制備10mM儲備溶液。

1.2制備2X半胱天冬酶底物（50μM）測定溶液，如下所示：

50 uL基質原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris緩沖液（20mM），pH = 7.4

1.3將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟1.2）混合，并在室溫下孵育溶液至少1小時。

1.4使用熒光酶標儀檢測熒光，或使用吸光度酶標儀檢測吸光度。

2.細胞Caspase檢測使用細胞滲透FMK半胱天冬酶探針

2.1在DMSO中制備2-5mM儲備溶液。

2.2根據需要對細胞進行處理。

2.3通過用20mM Hepes緩沖液（HHBS）稀釋Hanks中的DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X可滲透的半胱天冬酶底物（20μM）測定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟2.3）混合等體積的處理細胞，并將細胞在37℃，5％CO 2培養箱中孵育至少1小時。

2.5用HHBS洗滌細胞至少一次。

2.6用流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。

3.細胞Caspase檢測使用細胞滲透性FMK Caspase探針（僅適用于＃13470-13476）

3.1通過向小瓶中加入50μLDMSO制備250X儲備溶液。

3.2根據需要對細胞進行處理。

3.3將250 X DMSO儲備溶液（來自步驟3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL細胞）添加到細胞溶液中，并將細胞在37°C，5％CO 2培養箱中孵育1 小時。

3.4用HHBS洗滌細胞至少一次。

3.5用流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。