Amplite 熒光法神經鞘磷脂檢測試劑盒   紅色熒光 是美國AAT Bioquest生產的用于檢測鞘磷脂的試劑盒，鞘磷脂主要發現在細胞外表面，特別是神經組織中，其在信號傳導中扮演著重要角色。有研究發現，鞘磷脂在尼曼匹克癥和無脂蛋白血癥中存在不正常的積累。Amplite鞘磷脂熒光法檢測試劑盒采用了靈敏的方法檢測中性鞘磷脂的活性和篩選其抑制劑。這個試劑盒利用特別的Amplite Red作為熒光探針直接定量被鞘磷脂酶水解作鞘磷脂所產生的磷酸*堿的含量。它可以用來檢測血液、細胞提取物或者其他溶液中鞘磷脂的含量。Amplite Red的熒光強度與磷酸*堿產生成比例，從而實現鞘磷脂酶的定量。本試劑盒可用于96或384微孔板分析，并且無需任何額外步驟，就可以輕易地實現自動化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的Amplite 熒光法神經鞘磷脂檢測試劑盒。

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備SMase工作溶液（50 µL）
2.加入鞘磷脂標準品或測試樣品（50 µL）
3.在37°C下孵育1-2小時
4.加入鞘磷脂測定混合物（50 µL）
5.在室溫下孵育0.5-2小時
6.監視Ex / Em = 540/590 nm處的熒光強度（在570 nm處截止）

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環。
1.1 SMase儲備溶液（100X）：
將50 µL含0.1％BSA的PBS加入鞘磷脂酶（小瓶B）中，制成SMase儲備液（100X）。

1.2 Amplite Red儲備液（200X）：
將80 µL DMSO（組分G）加入小瓶Amplite Red（組分C）中，制成200X Amplite Red儲備液，避光。 注意：Amplite Red在存在硫醇（例如DTT和2-巰*乙醇）的情況下不穩定。 反應中DTT或2-巰*乙醇的終濃度應低于10 µM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）時也不穩定。 反應應在pH 7-8下進行。建議將pH 7.4用于測定緩沖液。

2.標準溶液

鞘磷脂標準品
向1000 µL SMase反應緩沖液（組分D）中加入2 µL 50 mM鞘磷脂（組分F），得到100 µM鞘磷脂標準溶液（SM7）。取100 µM鞘磷脂標準溶液進行1：3連續稀釋，以得到連續稀釋的鞘磷脂標準品（SM6-SM1）。

3.工作溶液

3.1 鞘磷脂酶（SMase）工作液：
將100X SMase儲液的全部內容物（50 µL）加入5 mL SMase Reaction Buffer（組分D）中，并混合均勻，以制備SMase工作溶液。 注意：應立即使用SMase工作解決方案。

3.2 鞘磷脂工作液：
將全部含量（5 mL）的測定緩沖液（組分E）添加到酶混合瓶（組分A）中，并充分混合。 在開始測定之前，將25 µL 200X Amplite Red儲備液加到Enzyme Mix溶液瓶中以制成鞘磷脂測定混合物。 注意：鞘磷脂測定混合物應立即使用，并避免光照。 較長的存儲時間可能會導致較高的測定背景。