Amplite 熒光法神經氨酸酶檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于β-半乳糖苷酶的試劑盒，神經氨酸酶，也稱為唾液酸酶，是糖苷水解酶，其催化末端唾液酸殘基和神經氨酸的水解。常見的神經氨酸酶是病毒神經氨酸酶。唾液酸和鄰近糖殘基之間的連接的切割允許病毒通過粘蛋白轉運并破壞宿主細胞上的血凝素受體，從而允許從感染細胞中洗脫后代病毒顆粒。神經氨酸酶促進感染細胞釋放流感病毒，并促進病毒在呼吸道內傳播。因此，它是流感開發的重要目標。神經氨酸酶的檢測和篩選其抑制劑是研究生物過程和預防流感感染的重要任務之一。有一些檢測試劑盒可用于檢測神經氨酸酶，但所有商業上可用的試劑盒使用起來都很繁瑣。我們的Amplite 熒光神經氨酸酶檢測試劑盒提供靈敏且穩定的熒光測定法，可檢測細胞或生物樣品中存在的神經氨酸酶。在神經氨酸酶切割后，非熒光神經氨酸酶底物變為強熒光。該試劑盒可在100μL測定體積中檢測低至0.3 mU / mL的神經氨酸酶。該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，并且易于適應自動化而無需分離步驟。熒光酶標儀在Ex / Em = ~320 / ~450nm處可以容易地讀取信號。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的Amplite 熒光法神經氨酸酶檢測試劑盒。

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備神經氨酸酶工作溶液（50 µL）
2.加入神經氨酸酶標準品或測試樣品（50 µL）
3.在37°C或室溫下孵育1-2小時
4.監控Ex / Em = 320/460 nm（截止= 420 nm）的熒光增加

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環。
1.1 神經氨酸酶標準溶液（2U / mL）：
將50 µL ddH2O加入小瓶神經氨酸酶標準品（組分C）中，制成約2 U / mL神經氨酸酶標準溶液。

1.2 FluLite 藍色原液（200X）：
將50 µL ddH2O加入FluLite Blue（組分A）小瓶中，制成200X儲備溶液。

2.標準溶液

神經氨酸酶標準品
將10 µL的2 U / mL神經氨酸酶標準儲備液加到990 µL的測定緩沖液（組分B）中，以生成20 mU / mL的神經氨酸酶標準品（NA7）。 取20 mU / mL神經氨酸酶標準溶液，并按1：2進行系列稀釋，以使用分析緩沖液（組分B）獲得系列稀釋的神經氨酸酶標準品（NA6-NA1）。 注意：稀釋的神經氨酸酶標準溶液不穩定。 在4小時內使用。

3.工作溶液

3.1 0.3％β-巰基乙醇測定緩沖液：
將30 µLβ-巰基乙醇（組分F）添加到10 mL反應緩沖液（組分B）中，并充分混合。
注意：制備酶稀釋緩沖液需要額外的緩沖液，用于生成標準曲線。

3.2 FDG工作方案：
將25 µL 1X FDG儲備溶液加到5 mL的0.3％β-巰基乙醇測定緩沖液中。 注意：請勿將FDG溶液在室溫下長時間放置，否則會發生自發水解。

3.3 裂解緩沖液工作液：
將25μL的200X FluLite 藍色儲備溶液添加到5 mL的測定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備神經氨酸酶工作溶液。