細(xì)胞內(nèi)NADH / NADPH熒光成像試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)NADH/NADPH的試劑盒，細(xì)胞內(nèi)二氫煙*胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的檢測(cè)對(duì)于疾病診斷和發(fā)現(xiàn)是重要的。通常，氧化還原偶聯(lián)NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代謝，糖酵解，三羧酸循環(huán)和線粒體呼吸中起關(guān)鍵作用。細(xì)胞中NAD（P）H水平的增加與活性氧（ROS）和DNA損傷的異常產(chǎn)生有關(guān)。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探針，在生物系統(tǒng)中檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NAD（P）H具有挑戰(zhàn)性。GAI試劑盒提供了監(jiān)測(cè)遠(yuǎn)光譜中活細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)NAD（P）H水平的有效方法，并且可以與其他應(yīng)用如GFP表達(dá)細(xì)胞或MitoTracker的應(yīng)用相結(jié)合。 JJ1902 NAD（P）H是一種的熒光探針，用于檢測(cè)和成像細(xì)胞中的NADH / NADPH。該熒光探針結(jié)合NADH / NADPH，產(chǎn)生高靈敏度和特異性的強(qiáng)熒光信號(hào)。 JJ1902 NAD（P）H傳感器可以很容易地加載到活細(xì)胞中，使用Cy5®過(guò)濾器可以方便地監(jiān)測(cè)其熒光信號(hào)。該試劑盒針對(duì)熒光成像和酶標(biāo)儀應(yīng)用進(jìn)行了優(yōu)化。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)NADH / NADPH熒光成像試劑盒。

實(shí)驗(yàn)樣品示例

概述

1.在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞

2.將細(xì)胞與測(cè)試化合物和JJ1902 NAD（P）H傳感器工作溶液在37℃孵育20  -  30分鐘

3.將細(xì)胞洗凈并保持在測(cè)定緩沖液中

4.在Ex / Em = 590/655 nm（截止= 610 nm）或使用Cy5®過(guò)濾器的熒光顯微鏡下監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度（底部讀取模式）

注意：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

操作方法

1.制備工作溶液

將10μL JJ1902 NAD（P）H探針儲(chǔ)備溶液（組分A）加入2.5mL測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合。該JZL1707 NAD（P）H探針工作溶液在室溫下1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

注意：40μL的JZL1707 NAD（P）H傳感器原液足以用于一個(gè)板

2.實(shí)驗(yàn)步驟

①刺激NADP / NADPH，用10μL10X試驗(yàn)化合物（96孔板）或5μL5X試驗(yàn)化合物（384孔板）在無(wú)血清培養(yǎng)基或所需緩沖液（如PBS或HHBS）中處理細(xì)胞。 對(duì)于對(duì)照孔（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的培養(yǎng)基或化合物緩沖液。

注意：JJ1902 NAD（P）H探針在血清存在的情況下也是兼容的。探針的條件優(yōu)化是強(qiáng)烈推薦的細(xì)胞系到細(xì)胞系。

②在細(xì)胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JJ1902 NAD（P）H探針工作溶液。將細(xì)胞與測(cè)試化合物和JJ1902 NAD（P）H探針工作溶液在37℃共孵育20-30分鐘，避光。

注意：對(duì)于NADH / NADPH陽(yáng)性對(duì)照處理：將HeLa細(xì)胞與100μMNADH或NADPH在無(wú)血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘，并與JJ1902 NAD（P）H探針工作溶液在37℃下共培養(yǎng)30分鐘。

③用所需緩沖液洗滌細(xì)胞一次。移除每個(gè)孔中的溶液，并添加100μL/孔的測(cè)定緩沖液（組分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

④使用底板讀取模式在Ex / Em = 590 / 655nm（截止= 610 nm）下使用酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)熒光增加，或使用熒光顯微鏡和Cy5®過(guò)濾器過(guò)濾器獲取圖像。