Amplite 熒光法賴氨酰氧化酶檢測試劑盒 紅色熒光是美國AAT Bioquest生產的用于檢測賴氨酸氧化酶的試劑盒。賴氨酰氧化酶是一種細胞外酶，其催化從膠原蛋白和彈性蛋白前體中的賴氨酸殘基形成醛。 這些醛具有高反應性，并與其他賴氨酰氧化酶衍生的醛殘基或未修飾的賴氨酸殘基發生自發的化學反應。 化學反應導致膠原蛋白和彈性蛋白的交聯，這對于穩定膠原纖維和成熟彈性蛋白的完整性和彈性是必需的。 生物樣品中賴氨酰氧化酶的活性傳統上通過使用放射性同位素標記的膠原蛋白或彈性蛋白底物的氚釋放終點測定來評估。

Amplite 熒光Lysyl氧化酶檢測試劑盒提供靈敏的熒光檢測，用于檢測賴氨酰氧化酶的活性。 它利用專有的LOX底物，在HRP偶聯反應中使用我們的Amplite ADHP底物釋放過氧化氫。 該方法允許檢測亞ng / mL賴氨酰氧化酶，并且比目前可用的測定靈敏得多。 它除了某些生物樣品中發生的干擾，可以很容易地用于檢測細胞提取物或溶液中的賴氨酰氧化酶活性。 其信號可通過Ex / Em = 540/590 nm的熒光酶標儀或~576 nm的吸光度酶標儀輕松讀取。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的Amplite 熒光法賴氨酰氧化酶檢測試劑盒 。

實驗方案

96孔板測定示例

概述

準備測定反應混合物（50μL）

添加賴氨酰氧化酶標準品或測試樣品（50μL）

在37℃孵育10-30分鐘

在Ex / Em = 540/590 nm處監測熒光強度

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

操作方法

1.準備試劑：

注意1：在硫醇如DTT，谷*甘肽（還原型：GSH）和β-巰基乙醇存在下，Amplite™HRP底物不穩定。濃度高于10μM的硫醇的存在將顯著降低測定動態范圍。

注意2：某些洗滌劑（如Brij-35，Tween-20和NP40），NADH和NADPH也會干擾檢測。

1.1 250X Amplite™HRP底物儲備液：將100μLDMSO（組分D）加入到Amplite™HRP底物（組分A）的小瓶中。應及時使用原液; 任何未使用的溶液應等分并在-20℃重新冷凍。

注意：避免反復凍融循環。

1.2 50U / mL辣根過氧化物酶儲備溶液：將1mL測定緩沖液（組分B）加入到辣根過氧化物酶（組分C）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液應分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

2.準備測定反應混合物：

根據說明書中的表格制備測定反應混合物并避光。

3.在上清液中進行賴氨酰氧化酶測定：

3.1將50μL測定反應混合物（來自步驟2）加入到賴氨酰氧化酶標準品，空白對照和測試樣品（參見步驟2，表3）的每個孔中，以使總賴氨酰氧化酶測定體積為100μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μL測定反應混合物。

3.2在37℃下孵育反應10至30分鐘，避光。

3.3用Ex / Em = 540 / 590nm的熒光板讀數器監測熒光增加。

注意：也可以將板的內容物轉移到白色透明底板上，并用吸光度酶標儀在576±5nm的波長下讀數。 與熒光讀數相比，吸收檢測具有較低的靈敏度。

4.對細胞進行賴氨酰氧化酶測定：

Amplite™熒光Lysyl氧化酶檢測試劑盒可用于測量細胞中活性賴氨酰氧化酶的釋放。 以下是建議的說明，可根據您的特定研究需求進行修改。

4.1在96孔板（50-100μL/孔）中制備細胞，并根據需要活化細胞。

注意：包括陰性對照（單獨培養基和非活化細胞）用于測量背景熒光。

4.2將50 µL賴氨酰氧化酶工作溶液添加到細胞培養基的每個孔中（來自上一步）和賴氨酰氧化酶標準品的孔中（參見表1）。 對于384孔板，請向每個孔中添加25 µL工作溶液。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL細胞培養基和25μL測定反應混合物。

4.3在37℃下孵育反應10至30分鐘，避光。

4.4使用熒光讀板儀在Ex / Em = 530至570/590至600 nm（大Ex / Em = 540/590 nm）下觀察熒光增加。