一、細胞基本屬性 | |
細胞名稱 | 人正常前列腺基質永生化細胞 |
細胞別稱 | WPMY-1 |
細胞貨號 | SNL-019 |
細胞種屬 | 人 |
生長情況 | 貼壁 |
培養條件 | H-DMEM+10%FBS+1%雙抗 |
培養環境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、細胞培養操作 | |
換液周期 | 2-3天 |
培養基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1.盡量吸干凈T25瓶原培養基; 2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右*,輕輕晃動培養瓶以使*鋪勻瓶底細胞層; 4.將培養瓶放入37度培養箱消化; 5.消化到細胞間隙變大,但未*脫落時加2-3ml*培養基終止*消化; 6.混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清; 7.加新的*培養基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養瓶里; 8.補足*培養基,將培養瓶放回培養箱靜置培養; |
注意事項 | 不同品牌*消化時間差別較大,注意嚴格控制消化時間 消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。 |
三、細胞凍存操作 | |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手tui薦)或92%*培養基+8%DMSO(高手tui薦); |
凍存規格 | 200-300萬/ml,1ml每管 |
凍存方法 | 1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞; 2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管; 3.將凍存管轉入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉入-80度過夜,第二天轉入液氮保存 |
注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案 |
Tips:
1.細胞密度低時生長偏慢,注意控制細胞密度;
2.細胞培養時黑點可能會比較多,具體原因參見培養操作說明2、3條;
我們tui薦使用尚恩生物WPMY-1(人正常前列腺基質永生化細胞)鉆用*培養基(產品貨號:SNLM-019)作為體外培養WPMY-1(人正常前列腺基質永生化細胞)的培養基。