豬表皮生長因子EGF ELISA試劑盒

 用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

上海研吉生物有限公司代理幾千種 ELISA 試劑盒，數萬種抗體，并代理產品近萬種，涉及分子生物學、分子免疫學、細胞生物學、部分國產化學試劑和實驗儀器等生命科學研究的各個領域。為了節省您的時間，我們還可以提供代檢測服務。

    ELISA 試驗時，注意事項如下：

     1.　正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

    2.　在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

    （1）　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

   （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。

    （3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

    （4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入

   具體事項請。

   ◇細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的 成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

   ◇組織標本：

切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

   檢測原理：

采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

保存溫度：2-8℃保存6個月.

注意事項：

收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在 4 ℃ 備用，如有特殊 原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復凍融。標本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時， -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。

   備注:以上為ELISA試劑盒通用說明書,不包括特別的試劑盒,具體的請參照每個產品的說明書