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注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品名稱:結(jié)腸癌細胞;SW480
英文簡稱:SW480細胞
貨號:LZ-X968337
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁生長
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
綿羊性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-苯肼鹽鹽厚環(huán)乳牛肝菌拉丁屬名: Zygosaccharomyces bailii
綿羊紅激因子(ESF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-苯肼鹽鹽拜耳接合酵母注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
綿羊補體因子4 (C4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-苯肼鹽鹽米根霉用途: 飼料用酶的篩選
綿羊解整合素金屬蛋白酶9(ADAM9)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Lapib多育曲霉拉丁屬名: abortus BiovarⅠ
綿羊骨粘連蛋白(ON)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N--4-哌啶布魯氏菌 生物Ⅰ型用途: 試驗栽培
綿羊髓鞘性蛋白(MBP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N--4-哌啶香菇用途: 分類、研究,具有用作耐重金屬因資源潛力。
綿羊絲氨蛋白酶12(PRSS12)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1-(3-芐)哌假單胞菌拉丁屬名: Lactobacillus johnsonii
綿羊腫瘤壞死因子受體超家族成員1B(TNFRSF1B)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1-(3-芐)哌約氏乳桿菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
綿羊微管蛋白α3C(TUBα3C)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N,N-二乙乙酰產(chǎn)單核李氏桿菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
綿羊集落激因子2受體β (CSF2Rβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N,N-二乙乙酰平菇拉丁屬名: Botrytis cinerea Pers.
綿羊重肽鐵蛋白(FTH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N,N-二乙乙酰灰葡萄孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
綿羊八聚體轉(zhuǎn)錄因子2A(OTF2A)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-溴-4-羥苯拉曼傘狀霉拉丁屬名: Bacillus subtilis
綿羊粘蛋白1(MUC1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-溴-4-羥苯枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Botryosphaeria sinensia
綿羊谷轉(zhuǎn)氨酶(ALT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1-(3-氨)吡咯烷中國葡萄座腔菌拉丁屬名: Phomopsis theae Petch
綿羊Sp100核抗原(Sp100)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1-(3-氨)吡咯烷茶擬莖點霉拉丁屬名: Natrinema pellirubrum
綿羊蛋白激酶抑制劑α(PKIα )酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N,N'-二-9,9'-聯(lián)吖啶鎓硝鹽隱紅線菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
SW480細胞雞血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-Phospho-Cyclin B1 (Ser133) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素B1抗體IgG
雞血小板激活因子(PAF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Cyclin C/FITC 熒光素標記周期素C抗體IgG
雞免疫球蛋白E Fc段受體I(FcεR I)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-Cyclin D1/FITC 熒光素標記周期素D1蛋白抗體
雞半乳凝集素9(GAL9)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Phospho-Cyclin D1 (Thr286) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化cyclin D1抗體IgG
雞載脂蛋白A4(ApoA4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-Cyclin D2/FITC 熒光素標記周期素D2抗體IgG
雞絲裂原激活蛋白激酶激酶1(MAP2K1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Cyclin D3/FITC 熒光素標記周期素D3抗體IgG
雞Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Cyclin E/FITC 熒光素標記周期素E/原癌因抗體IgG
雞B淋巴激活抗原B7-2(LAB7-2/CD86)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-phospho-Cyclin E(Thr62) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素E抗體IgG