目錄:上海聯(lián)祖生物科技有限公司>>科研細(xì)胞>>細(xì)胞系>> Duckembryo細(xì)胞
產(chǎn)品名稱:鴨子胚胎成纖維細(xì)胞;Duckembryo
英文簡稱:Duckembryo細(xì)胞
貨號:LZ-X968325
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁生長
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價(jià),產(chǎn)品貨期短,價(jià)格優(yōu),售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時(shí)間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時(shí),盡量縮短觀察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí),如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
雞谷氨脫羧酶抗體(GAD-Ab/Anti-GAD)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-氨噻吩-2-羧酯漢遜德巴利酵母fabryi變種注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
雞脂質(zhì)運(yùn)載蛋白1(LCN1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-氨噻吩-2-羧酯香菇(泌陽3號)用途: 害蟲生物防治
雞轉(zhuǎn)錄激活因子7(ATF7)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-氨噻吩-2-羧酯球孢白僵菌用途: 研究
雞磷肌-3-激酶2α肽(PI3K2α)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Methyl 6-hydroxy-5-nitropyridine-3-carboxylate平臍蠕孢菌拉丁屬名: Polaromonas vacuolata
雞間隙連接蛋白β1(GJβ1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1-對磺酰咪唑空泡單胞菌拉丁屬名: Enterobacter aerogenes Hormaeche and Edwards
雞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1-對磺酰咪唑產(chǎn)氣腸桿菌(現(xiàn)1)拉丁屬名: Brucella sp.
雞促生長激素(GH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(S)-(+)-1,2-異亞甘油布魯氏菌拉丁屬名: Halopelagius inordinatus
雞抵抗素(RETN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 (S)-(+)-1,2-異亞甘油不規(guī)則鹽海菌拉丁屬名: Flammulina velutipes
雞結(jié)合珠蛋白(HP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(S)-(+)-1,2-異亞甘油金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)用途: 研究
雞生長抑素受體1(SSTR1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4,6-二-2-巰嘧啶畫眉草彎孢注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
雞白介素17(IL-17)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4,6-二-2-巰嘧啶殼菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
雞成纖維生長因子21(FGF21)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4,6-二-2-巰嘧啶枯草芽胞桿菌拉丁屬名: Monascus purpureus
雞巨噬激蛋白(MSP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4,6-二-2-巰嘧啶紫紅曲霉規(guī)格: 1ml甘油管1支,20ul質(zhì)粒,一般次日下午
雞著絲粒蛋白H(CENPH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1--1-吡咯烷雙(三氟磺酰)亞鹽pBlueScript SK(+)拉丁屬名: Massilia brevitalea
雞性別決定區(qū)Y框蛋白18(SOX18)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1-正丁-1-吡咯烷二(三氟磺酰)酰亞馬賽菌屬拉丁屬名: Streptomyces angustmyceticus
雞血管緊張素III(ANG III)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 5-溴-2-吡啶狹霉素鏈霉菌拉丁屬名: Mrakia frigida
Duckembryo細(xì)胞雞白介素1β(IL-1β)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CNTF/FITC 熒光素標(biāo)記睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體IgG
雞血管緊張素II受體2(ANGⅡR2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-CNTFR Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記抗睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α抗體IgG
雞微管蛋白α3C(TUBα3C)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Collagen I/FITC 熒光素標(biāo)記抗I型膠原抗體IgG
雞間皮素(MSLN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Collagen II /FITC 熒光素標(biāo)記抗Ⅱ型膠原抗體IgG
雞集落激因子2受體β (CSF2Rβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Collagen III /FITC 熒光素標(biāo)記抗Ⅲ型膠原抗體IgG
雞核孔蛋白188kda(NUP188)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Collagen III /FITC 熒光素標(biāo)記抗Ⅲ型膠原抗體(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)IgG
雞趨化素樣因子超家族成員4(CKLFSF4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Collagen IV /FITC 熒光素標(biāo)記抗IV型膠原抗體IgG
雞促血管生成素2(ANG2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Collagen V /FITC 熒光素標(biāo)記抗Ⅴ型膠原抗體IgG
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