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組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:
1.基礎程序;
2.擴增溫度和延伸溫度;
3.反應時間;
4.循環次數;
5.PCR 反應液的配制;
6.PCR技術的基本原理;
7.PCR的反應動力學;
8.PCR擴增產物;
9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 豬肺炎支原體PCR檢測試劑盒價格 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7897 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
二甲基二硫代氨酸鋅(>95.0%(T))GSTP1 (3F2) Mouse mAb異噻唑啉酮
并紅紫4B[pH指示劑]Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser31) Antibody5-溴-2,二氟甲
間甲酚紫鈉鹽[pH指示劑]Phospho-Erk5 (Thr218/Tyr220) Antibody硝基芐鹽酸鹽
五甲氧基紅(>98.0%(HPLC))Phospho-Erk5 (Thr218/Tyr220) Antibody溴芐鹽酸鹽
甲基橙(>95.0%(W))Erk5 Antibody6--1-羥基并三氮唑
溴酚藍[pH指示劑]Cathepsin B (G60) Antibody6-溴煙酸甲酯
基橙[pH指示劑]TrkC (C44H5) Rabbit mAb6-甲氧基煙酸甲酯
氧基橘紅鹽酸鹽(>95.0%(T))SimpleChIP® Human HUWE1 Intron 26 Control Primers三環己基膦
2,5-二酚(加約20%水濕潤,本品干重約為5g)(>99.0%(T))Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb2-甲
間二酚藍[pH指示劑]Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb酸薄荷酯
2-酚鈉鹽(>99.0%(HPLC)(T))PCAF (C14G9) Rabbit mAbalpha-溴-甲氧基酮
甲酚紅鈉鹽[pH指示劑]PCAF (C14G9) Rabbit mAb2-疏基吡啶
雙(2,二)酸酯(>98.0%(HPLC))PRMT4/CARM1 (C31G9) Rabbit mAb4,4'-偶氮雙(基戊酸)
(1R,2R)-2-(萘-2,二甲酰亞基)環己甲酸(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-NMDA Receptor 1 (GluN1) (Ser890) AntibodyH-ORN(CBZ)-OH
(1S,2S)-2-(萘-2,二甲酰亞基)環己甲酸(>98.0%(HPLC)(T))NHERF1 (A140) Antibody2,5-二氟甲
(1S,2S)-2-(蒽-2,二甲酰亞基)環己甲酸(>97.0%(HPLC))
Cathepsin B (H190) Antibody (Mouse Preferred)甲基環戊二二聚體
Nα-(5-氟-2,二基)-L-亮氨酰(>98.0%(HPLC))Phospho-NMDA Receptor 1 (GluN1) (Ser896) AntibodyN-芐氧羰基-L-谷氨酰
Nα-(2,二硝基-5-氟基)-D-亮氨酰銨(>98.0%(HPLC))Phospho-NMDA Receptor 1 (GluN1) (Ser897) Antibody硝基吡唑
性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)ELISA試劑盒Parvalbumin 細小清蛋白20 ul
性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒PTTG 垂體腫瘤轉化基因1Kit
性成纖維生長因子(bFGF)ELISA試劑盒Peptide YY/PYY 酪酪肽100 ul
甲狀腺素(TAb)ELISA試劑盒Rad17 細胞周期檢控Rad17蛋白100 ul
甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒Phospho-Rad17 (Ser645) 酸化細胞周期檢控Rad17蛋白100 ul
甲狀腺球蛋白IgGELISA試劑盒Rad51 Rad5120 ul
甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒Rad52 Rad52100 ul
甲狀腺過氧化物酶(TPO)IgGELISA試劑盒RAD51C 癌和卵巢癌易感基因RAD51C100 ul
甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒RAP1A 抗Rap1A100 ul
豬肺炎支原體PCR檢測試劑盒價格鈣激活氯離子通道4抗體Tachioside中文名:別名:分子式:C13H18O8
非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體2,4-Dihydroxyphenylacetic acid中文名:2,4-二羥基別名:2,4-Dihydroxybenzeneacetic acid分子式:C8H8O4
2號染色體開放閱讀框65抗體5,7-Dihydroxy-2-isopropylchromone中文名:別名:分子式:C12H12O4
富半胱氨酸肝素結合蛋白61抗體Piceatanl中文名:白皮杉醇別名:3,3',4,5'-Tetrahydroxystilbene分子式:C14H12O4
細胞角蛋白5+6抗體Nervogenic acid中文名:別名:4-Hydroxy-3,5-diprenylbenzoic acid分子式:C17H22O3