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目錄:上海聯祖生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測試劑盒>> 50T宿主細胞殘留 DNA 試劑盒(磁珠法) 分子生物試劑

宿主細胞殘留 DNA 試劑盒(磁珠法) 分子生物試劑
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參考價 2900
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協議為準
2900
≥1
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 其他品牌
  • 型號 50T
  • 廠商性質 代理商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2023-02-24 11:39:41瀏覽次數:1122評價

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宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(磁珠法)

試劑盒簡介

宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(磁珠法)用于樣本的前處理,可穩定高效地提 樣本中殘留的痕量宿主 DNA

試劑盒組分

序號

規格

存條件

1

解液

15ml×1

室溫

合液(異丙醇)

洗滌液

40ml×2

本稀釋液

15ml×1

5M NaCl

1ml×1

白酶 K

1ml×1

6ml×1

洗脫液

10ml×1

2

糖原

1ml×1

-20oC

tRNA

50ul×1

有效期: 12 個月

宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒驗流程(手工操作):

在開展實驗前, 請用精密 pH  試紙條測定樣本的 pH 值并將樣本 pH 值調節至 6-8.

實驗準

本準備

本消化

DNA 捕獲

DNA 洗脫

驗操作細則:

一、 樣本處理:

1.   100ul 待檢樣本至 1.5ml 干凈的離心管中,加入 10ul 5M  NaCl  溶液,用渦旋       蕩器充分震蕩 10

2.   加入 10ul 蛋白酶 K,在渦旋振蕩器上充分震蕩 10

3.  配制新鮮的裂解液,其組成為: 130ul  裂解液/100ul  樣本, 9ul  肝糖原/100  樣本, 0.2ul tRNA/100ul 樣本,充分混勻以制成新鮮配制的裂解液

4.   139ul 新鮮配制的裂解液加入到樣本管中, 然后用渦旋振蕩器充分震蕩 10 秒, 取出短 暫快速離心 5 秒,然后放置在 56oC 孵育 30 分鐘;

二、 DNA 捕獲:

1.     將磁珠充分渦旋振蕩以*重懸;

2.     將樣本管從孵育器中取出, 進行簡短的離心,將液體收集到管底,然后加入*重懸的 磁珠 60ul 230ul 結合液,在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒; (注意: 在加入磁珠時, 需經 常振蕩重懸磁珠, 以保證吸取時磁珠的均勻性。建議每加 3-4 組樣本后, 重懸磁珠后進行 續樣本的添加)

3.    將震蕩后的樣本管,置于旋轉混勻器或渦旋振蕩器上 10 分鐘以進行磁珠捕獲;

4.     將樣本管從旋轉混勻器上取下,在 10000g 的條件下離心 1 分鐘使磁珠充分聚集;

5.     將離心后的樣本管置于磁力架上, 待溶液*澄清后, 用槍頭小心移去上清(注: 避免 攪動磁珠,使得磁珠同上清一起被除去從而影響得率);

宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒 洗滌:

1.     樣本管移去上清后,不必將樣本管從磁力架上取下,直接加入 400ul 洗滌液;

2.     待溶液*澄清后,磁珠*分離,用槍頭小心移去上清;

3.     保持樣本管在磁力架上, 加入 400ul 洗滌液, 待溶液澄清, 磁珠*分離后, 用槍頭小 心移去上清

4.     將樣本從磁力架上取下, 10000g 的條件下離心 30 秒,使得殘留的洗滌液*聚集 到管底;

5.   將樣本管置于磁力架上,待磁珠*分離后,用 10ul 槍頭小心移除殘留的液體;

6.     將樣本管從磁力架上取下,置于 70oC 金屬浴中,放置 4 分鐘, 除去殘留的乙醇(注 干燥不夠, 殘留的乙醇會影響后續的定量檢測反應);待磁珠團出現裂紋時,將樣本管從 金屬浴中取出進行 DNA 洗脫;

DNA 洗脫:

1.     沿著樣本管的管壁加入 50- 100ul 洗脫液,用 100ul 的槍頭反復吹吸,以*重懸磁珠;

2.     將樣本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分鐘;

3.   將樣本管從孵育器中取出,于 20000g 離心 2 分鐘,然后至于磁力架上,待磁珠*分 離后,用 10ul 槍頭小心將上清液體轉移至新的干凈的離心管中;

4.    為了避免吸入磁珠,在離心管中還剩余少量液體時,將其于 20000g 離心 2 分鐘,然后 至于磁力架上以吸出剩余的液體

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