目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞分物學(xué)>>細(xì)胞培養(yǎng)>> 小鼠肥大細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
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公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務(wù),同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。公司產(chǎn)品僅用于科研,不得用于臨床.
產(chǎn)品名稱 | 小鼠肥大細(xì)胞 |
英文名稱 | MC-9 |
規(guī)格 | 詳見說明 |
注意事項:
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
MG-63人骨肉瘤細(xì)胞 Human osteosarcoma cell line MG-63 MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%優(yōu)質(zhì)熱滅活FBS2-奈酚1克
DKK1 Protein Rhesus 重組恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, Fc 標(biāo)簽)S-腺苷-L-高半胱安醋(-20℃) 5'-DqOXY-S-cDqNOSYL-L-HOMOCYSTqINq 979-9-0
人胚肺成纖維細(xì)胞;HFL1 人成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mLL-瓜酸1公斤
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0909雜交袋2500U
人口腔角質(zhì)細(xì)胞(HOK)( 5×105 )(聚酮)
上皮細(xì)胞生長添加物MEpiCGS羥基脲Hydroxyurea/Hydroxycarbamide質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
MAP2K6 Others Human 人 MKK6 / MEK6 / MAP2K6 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羥基脲(標(biāo)準(zhǔn)品)Hydroxyurea/Hydroxycarbamide質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人Butt瘤細(xì)胞;RAJI枸櫞酸托瑞米芬Toremifene 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
MFC細(xì)胞,胃癌細(xì)胞 綠色熒光蛋白標(biāo)記人胃癌細(xì)胞,MGC803-GFP細(xì)胞 恒河猴胚腎細(xì)胞;FRhK-4 [FRhK4]枸櫞酸托瑞米芬Toremifene 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
大鼠垂體瘤細(xì)胞;GH3枸櫞酸托瑞米芬(標(biāo)準(zhǔn)品)Toremifene 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肥大細(xì)胞海馬神經(jīng)元細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)正十六烷(Standard for GC,>99.5%(GC))Hexadecane質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99.5%(GC)
PTN Others Mouse 小鼠 Pleioophin / PTN / HB-GAM 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 正十六烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))Hexadecane質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)
大鼠冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL2-萘磺酸鈉(>98%,BR)-2-naphthalenesolfonate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
RBL-2H3大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞 RBL-2H3 rat neuophils alkaline cell leukemia MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+15%熱滅活FBS司班20Span* 20質(zhì)量規(guī)格:BR
IFNA2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNA2 / Ierferon alpha 2 蛋白 (His 標(biāo)簽)全染色劑(>95%,BS)Stains-All質(zhì)量規(guī)格:>95%,BS
細(xì)胞接受后的處理:
1) 收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4) 如果細(xì)胞長滿(90%以上)請及時進行細(xì)胞傳代。
5) 接到細(xì)胞次日,請檢查細(xì)胞是否污染,
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)