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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>其它系列>> 脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)測試盒微量法

脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)測試盒微量法
  • 脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)測試盒微量法
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
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更新時間:2023-12-29 09:01:49瀏覽次數(shù):824評價

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貨號 BK-01S6397
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本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6397

商品介紹:

測定意義:

DHAR存在于細胞質(zhì)、線粒體和葉綠體中。DHAR催化GSH還原DHA生成AsAGSSG,調(diào)控細胞AsA/DHA比值,是抗壞血酸-氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶。提高植物體內(nèi)的 DHAR 活性,可提高植物食品中AsA含量,進而提高植物食品的營養(yǎng)品質(zhì)。

測定原理:

DHAR催化GSH還原DHA生成AsA,通過測定DHA減少速率,計算DHAR活性。

實驗中所需儀器及設(shè)備:

研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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實驗結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

 

操作步驟:

1. 樣品的準備:

a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

1 管 TH1大腸桿菌 TH1 E.coli Strain -80℃保存

2 ug pSecTag2/Hygro A pSecTag2/Hygro A 低溫運輸,-20℃保存

50次 土壤RNAout Soil RNAOUT 4℃保存

100mL MOBS Buffer,0.2M,pH7.4   MOBS Buffer,0.2M,pH7.4   常溫保存

不*瓊脂培養(yǎng)基 Incomplete Agar Medium 250g

100mg 制 Nystatin -20℃保存

50T 通用型H1-H15亞型PCR試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

50 μg Mito-Tracker Green(線粒體綠色熒光探針) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

100mL CAPS Buffer,0.5M,pH9.0  CAPS Buffer,0.5M,pH9.0  常溫保存

100mL Denhardt溶液,50×(非同位素用) Denhardt Solution, 50× -20℃保存

2 ug pGL4.37[luc2P/ARE/Hygro] pGL4.37[luc2P/ARE/Hygro] 低溫運輸,-20℃保存

脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)測試盒微量法CD45/B220  白細胞共同抗原抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mouse Anti-Bov IgG/Gold  膠體金標記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.5ml

L-Selectin/CD62L  L選擇素抗體 規(guī)格: 0.1ml

DDRGK1  DDRGK1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

BMP1  骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切抗體 規(guī)格: 0.2ml

FPR1  甲酸基肽受體1抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD56/NCAM1  神經(jīng)細胞粘附分子1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml

Newcastle disease virus  雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合毒)抗體 1ml

CD69/CLEC2C/AIM  活化誘導分子CD69抗體 規(guī)格: 0.1ml

BRN3B/POU4F2  腦特定蛋白Brn3B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Podoplanin Protein/gp36  平足蛋白抗體(淋巴管內(nèi)皮細胞蛋白) 0.1ml

 


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