1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘。
Rho GTP酶激活蛋白20抗體
含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體
乙醛脫氫酶1蛋白家族L1抗體
軸抑制蛋白2抗體
血管生成素相關蛋白6抗體
Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體
酪氨酸蛋白激酶受體A8抗體
脂肪酰輔酶A家族成員1抗體
芳香烴受體核轉錄蛋白樣2抗體
磷酸化芳香胺N-乙酰化轉移酶抗體
肌動蛋白結合蛋白1抗體
粘附分子IgG樣結構域蛋白2抗體
肌動蛋白結合蛋白DOC6抗體
AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟失調蛋白28抗體
激活素受體相互作用蛋白1抗體
醛固酮類還原酶家族7成員A2抗體
蛋白激酶AKT1,2,3抗體
帕金森病相關蛋白ATP13A2抗體
磷酸化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體
酰基輔酶A脫氫酶長鏈抗體
細胞分裂周期蛋白5抗體
β淀粉樣肽/Aβ42抗體
ADCK4蛋白抗體
抑癌蛋白AIMP3抗體
蛋白激酶A錨定蛋白6抗體
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