傅經理
ATP染色
一、染色步驟
1、工作液配制:?Tris堿5g+氯化鈣0.499g+蒸餾水定容至250ml,室溫保存。?取?染液中合
適的量,用鹽酸調PH至10.4。?取?染液中合適的量,每10ml的量加15mg的ATP鈉鹽,充
分溶解,調PH至9.4。
2、工作液孵育:未經固定的新鮮組織冰凍切片自然晾干,PH10.4的工作液孵育5min,傾去孵育液,PH9.4的工作液孵育30min。
3、CaCL2染色:傾去孵育液,CaCL2溶液處理3次,每次2min。
4、硝酸鈷染色:硝酸鈷作用5min,流水沖洗5min。
5、硫化銨染色:1%硫化銨溶液處理30s,流水沖洗5min。
6、脫水封片:切片依次入無水乙醇I 5min -無水乙醇II 5min-無水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明,中性樹膠封片。
7、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。
二、結果判讀:
Ⅰ型呈淺灰色或無色,Ⅱ型呈深灰或黑色,分型清楚。
ATP染色三、注意事項:
1、切片一定要是新鮮組織的冰凍切片,不可以固定。
2、Tris堿、氯化鈣粉劑常溫保存,硫化銨常溫避光保存,ATP鈉鹽-20℃保存,其它染液4℃
保存,使用前先復常溫。
3、工作液和1%硫化銨溶液要現配現用,不能保存。