糞便彈性蛋白酶-1(fecal elastase-1,FE-1)由胰腺腺泡細胞分泌,具有高度穩定性,在腸道中幾乎不被分解,室溫下能保持穩定長達1周,且取樣方便易行,檢測過程不受外源性Pancreatin制劑的影響。
定義與功能
定義:糞彈力蛋白酶(FE-1)是一種通過腸道排泄的彈力蛋白酶,它能夠抵抗細菌蛋白酶的水解,并在室溫下保持穩定。
功能:作為胰腺外分泌功能的指標,FE-1的測定對于診斷胰腺外分泌功能不全具有重要意義。
檢測方法
主要方法:酶聯免疫吸附實驗(ELISA)。通過收集受試者的少量糞便樣本,利用ELISA技術測定FE-1的含量。
檢測原理:
ELISA檢測基于抗原與抗體之間的特異性結合原理。在檢測過程中,首先將FE-1抗體包被在微孔板表面,然后加入待測的糞便樣本。如果樣本中存在FE-1,則會與抗體結合形成抗原-抗體復合物。接著,加入酶標記的二次抗體,該抗體會與抗原-抗體復合物結合,形成“抗體-抗原-酶標抗體”復合物。最后,加入酶底物,酶會催化底物產生顏色反應,顏色的深淺與樣本中FE-1的含量成正比。通過測量顏色反應的強度,可以定量測定糞便中FE-1的含量。
檢測步驟
ELISA檢測FE-1的步驟通常包括以下幾個方面:
試劑準備:將ELISA試劑盒中的各組分(如包被抗體、酶標抗體、底物等)按照說明書進行準備。
樣本處理:收集受試者的糞便樣本,并按照說明書進行適當處理(如稀釋、離心等)。
加樣:將處理后的樣本加入已包被FE-1抗體的微孔板中。
孵育:將微孔板在適當的溫度下進行孵育,使樣本中的FE-1與抗體充分結合。
洗滌:去除未結合的成分,保留抗原-抗體復合物。
加酶標抗體:向微孔板中加入酶標二次抗體,形成“抗體-抗原-酶標抗體”復合物。
再次孵育和洗滌:重復孵育和洗滌步驟,確保形成穩定的復合物。
加底物顯色:加入酶底物,酶催化底物產生顏色反應。
終止反應和讀數:加入終止液終止反應,并使用酶標儀在特定波長下測量各孔的吸光度值,根據標準曲線計算樣本中FE-1的含量。
臨床應用
FE-1 ELISA檢測在臨床中主要用于評估胰腺外分泌功能。當胰腺外分泌功能受損時,糞便中FE-1的含量會相應降低。因此,通過檢測糞便中FE-1的含量,可以間接反映胰腺外分泌功能的狀態。該方法在診斷胰腺外分泌功能不全、慢性胰腺炎等胰腺疾病中具有重要的應用價值。同時,由于該檢測方法簡便易行、成本相對較低且不受Pancreatin替代療法的影響,因此在臨床上得到了廣泛應用。