ELISA，酶聯(lián)免疫法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）是將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，利用抗原抗體的特異性反應(yīng)，對樣本中可溶性目的產(chǎn)物進(jìn)行定量檢測。

ELISA 與常規(guī)免疫實(shí)驗(yàn)對比

ELISA樣本制備簡單；靈敏度高；特異性強(qiáng)；重復(fù)性好；操作簡單；檢測儀器易獲得。

常見ELISA種類

一、直接ELISA

原理：將抗原與固相載體連接，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加酶標(biāo)抗體進(jìn)行孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。CHED I洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。加底物反應(yīng)。直接法主要用于測定抗原。

二、間接法ELISA

原理：將抗原與固相載體相連結(jié)，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，加酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合，從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，加底物顯色。

三、雙抗夾心法ELISA

原理：雙抗體夾心法適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子，但不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加入待檢樣品，保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。加酶標(biāo)抗體（檢測抗體）保溫孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。CHEDI洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。加底物反應(yīng)。

雙抗原夾心法測抗體的反應(yīng)模式與測抗原相似，用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體。

四、競爭法ELISA

原理：競爭法ELISA最為復(fù)雜，通常用于檢測小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競爭相同的有XIANLIANG抗體，當(dāng)樣品中的游離抗原越多，就可結(jié)合越多的抗體，而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物，只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物。顯示經(jīng)計(jì)算可得樣品中抗原的含量。競爭法可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置直接法、間接法或夾心法形式。

不同 ELISA 檢測方法比較

ELISA應(yīng)用場景