流式細胞檢測樣本的制備介紹

流式細胞術對細胞的分析檢測必須基于單細胞的基礎上，是流式細胞術的基本要求。因此就必須把待檢測的 外周血、 實體組織 等樣本 制備成單細胞懸液。在應用中，制備出合格的單分散細胞 是流式細胞術樣本制備技術中重要的一環(huán)。它要求這種分散細胞的方法既要使細胞成為單個細胞，又能保持細胞的固有生物化學成分及生物學特性。流式細胞術樣品制備大致可分為下面五個步驟：

①取材必須具有代表性，如取手術腫瘤組織，必須取瘤細胞生長旺盛部位， 組織等標本必須在取材后保持樣 本的新鮮，一般 在室溫 1 個小時之內處理好樣本或及時用固定劑或 28 ℃低溫 對組織進行保存；

②對細胞的待測生物化學成分進行熒光染色，制成合適的單細胞懸液；

③按照廠家提供的軟件程序對樣本進行獲取、檢測和存儲；

④再依照軟件提供的程序對檢測結果進行檢測分析；

⑤檢測分析結果在生物、 醫(yī)學上的意義進行分析和評價。

流式細胞檢測樣本的制備

原理與操作：

樣本制備儀是是一套安全的，標準化的樣本制備系統(tǒng)，可對植物或動物的實體組織進行自動機械分離，為流式分析、細胞培養(yǎng)、或 DNA 擴增技術提供高質量的樣本。整套系統(tǒng)對操作人員的技術要求不高，而且可對各種類型的組織實現(xiàn)標準化的樣本處理。目前常見的制備儀有 BD 的 Medimachine 系統(tǒng)、圣泰科（Syntec）的 MediMachineII 單細胞懸液制備系統(tǒng)、美天旎的 GentleMACS 全自動組織處理器。

其原理可簡述成下列三點：

① 首先將獲得的組織除去脂肪和壞死部分，剪成 10mm3左右的小塊和緩沖液（比如 PBS ）一起放入儀器倉中。

② 啟動儀器，根據(jù)組織的類型和你所需細胞懸液的要求選擇儀器運作的時間（從10 秒到 4 分鐘不等），對于任何一種組織 和所需的細胞懸液分離的時間都可以標準化，并適用于各個實驗室。

③ 組織被分離后，選擇合適的孔徑篩網(wǎng)來純化細胞懸液，過濾后的懸液將會進入儀器底部的收集區(qū)域。此時可用注射器收集區(qū)內回收我們所需的單細胞懸液，完成檢測樣本的制備。