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流式細胞檢測樣本的制備

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更新時間:2020-07-24 13:42:02瀏覽次數(shù):677

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產(chǎn)品簡介

流式細胞檢測樣本的制備取材必須具有代表性,如取手術腫瘤組織,必須取瘤細胞生長旺盛部位

詳細介紹

流式細胞檢測樣本的制備介紹

流式細胞術對細胞的分析檢測必須基于單細胞的基礎上,是流式細胞術的基本要求。因此就必須把待檢測的 外周血、 實體組織 等樣本 制備成單細胞懸液。在應用中,制備出合格的單分散細胞 是流式細胞術樣本制備技術中重要的一環(huán)。它要求這種分散細胞的方法既要使細胞成為單個細胞,又能保持細胞的固有生物化學成分及生物學特性。流式細胞術樣品制備大致可分為下面五個步驟:

①取材必須具有代表性,如取手術腫瘤組織,必須取瘤細胞生長旺盛部位, 組織等標本必須在取材后保持樣 本的新鮮,一般 在室溫 1 個小時之內(nèi)處理好樣本或及時用固定劑或 28 ℃低溫 對組織進行保存;

②對細胞的待測生物化學成分進行熒光染色,制成合適的單細胞懸液;

③按照廠家提供的軟件程序?qū)颖具M行獲取、檢測和存儲;

④再依照軟件提供的程序?qū)z測結果進行檢測分析;

⑤檢測分析結果在生物、 醫(yī)學上的意義進行分析和評價。

流式細胞檢測樣本的制備

原理與操作:

樣本制備儀是是一套安全的,標準化的樣本制備系統(tǒng),可對植物或動物的實體組織進行自動機械分離,為流式分析、細胞培養(yǎng)、或 DNA 擴增技術提供高質(zhì)量的樣本。整套系統(tǒng)對操作人員的技術要求不高,而且可對各種類型的組織實現(xiàn)標準化的樣本處理。目前常見的制備儀有 BD 的 Medimachine 系統(tǒng)、圣泰科(Syntec)的 MediMachineII 單細胞懸液制備系統(tǒng)、美天旎的 GentleMACS 全自動組織處理器。

其原理可簡述成下列三點:

① 首先將獲得的組織除去脂肪和壞死部分,剪成 10mm3左右的小塊和緩沖液(比如 PBS )一起放入儀器倉中。

② 啟動儀器,根據(jù)組織的類型和你所需細胞懸液的要求選擇儀器運作的時間(從10 秒到 4 分鐘不等),對于任何一種組織 和所需的細胞懸液分離的時間都可以標準化,并適用于各個實驗室。

③ 組織被分離后,選擇合適的孔徑篩網(wǎng)來純化細胞懸液,過濾后的懸液將會進入儀器底部的收集區(qū)域。此時可用注射器收集區(qū)內(nèi)回收我們所需的單細胞懸液,完成檢測樣本的制備。

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