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超微量分光光度計

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更新時間:2020-04-27 13:12:04瀏覽次數:304次

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超微量分光光度計從而得出相應的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液。然而,實驗并非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。

 超微量分光光度計因為熒光分析法的靈敏度高,其檢出限通常比分光光度法低2~4個數量級,選擇性也比分光光度法好,這是由于:a 熒光分析儀器在與激發光相垂直的方向測量熒光,與分光光度在一直線上測量相比,消除了透射光的影響,測量更為準確,靈敏度高;b 吸光光度法只采用一個單色器,而熒光分析儀器有兩個單色器,分別用于獲得單色性較好的激發光和分出某一波長的熒光,消除其它雜散光的干擾,其儀器的準確度、靈敏度也更高

 超微量分光光度計

 物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作。

 核酸的定量是分光光度計使用頻率高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數。如:1OD 的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。

  測試后的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液。然而,實驗并非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。

 

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