1×Taq PCR MasterMix(purple)

產品介紹： 1×Taq 預混液中包括TaqDNA 聚合酶，dNTPs，染料及PCR 反應所需的緩沖液，是一種即用型PCR 擴增試劑。使用時，只需加入引物和DNA 模板即可進行PCR 擴增, 引物和模板的加入總體積可以在 1-10µl 間變動，具有很強的可調性。該PCR 預混液能節省實驗時間， 避免了常規 PCR 試劑多次加樣 造成的實驗污染。預混液本身含有染料，擴增完成后可直接上樣，進行電泳檢測。

保存條件：-20℃保存，有效期一年。
產品用途：
常規PCR 擴增，菌落PCR，TA 克隆用的PCR 片段擴增，RT-PCR。
PCR 擴增體系：
1.單個樣本擴增時，按右表中所列順序添加其它成分。充分混勻后，離心數秒使反應混合物沉到管底，將反應管置于 PCR 儀中進行擴增。
2.多個樣本擴增時，可以在一個離心管中混合引物和1×TaqMasterMix，然后按比例分裝。例如需要 10個 50μl 體系的 PCR 擴增，每個樣本的模板量需加5μl，按左表中所列的量混合引物和 1×TaqMasterMix，然后分 45μl 到每個 PCR 管中，最后一一對應加 5μl待擴增的模板 DNA。離心數秒使反應混合物沉到管底，將反應管置于 PCR 儀中進行擴增。

PCR 循環設置：

*菌落PCR 時，94℃預變性5 分鐘，用于裂解細胞，失活核酸酶
*退火溫度則需按其引物的Tm 值來進行調整，一般
為Tm-5
*PCR 擴增產物用于TA 克隆時，72℃延伸15 分鐘為好
擴增模板：低復雜基因組模板（質粒、病毒、λ和BAC DNA 等）,50 μl 體系中添加10-100 ng；高復雜基因組模板，50 μl 反應體系中，模板的使用量應在 100-500 ng；cDNA 模板的添加量不要超過PCR反應體系的1/10，50 μl PCR 反應體系中RT 產物的加入量為2-3μl，不要超 過5 μl。
結果檢測：PCR 反應結束后，5-10 μl 擴增產物用含0.5 μg/ml 溴化乙錠（或合適濃度的其它 DNA 染色試劑），合適濃度的瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳完成后在紫外透射儀下觀察并記錄結果。

一、模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調節反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產物（＜500bp）的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優化。