2×SeamLess Mix  無縫重組酶

描述：

2XSuper Taq PCR Mix 是經(jīng)優(yōu)化的既用型 PCR 預(yù)混物，含有 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強劑和穩(wěn)定劑，使用時只需加入模板、引物和滅菌水即可進行 PCR 擴增，大大簡化了操作過程、提高了效率、減少了 PCR 操作過程中的人為誤差。具有快速簡便、重復(fù)
性高、特異性好、靈敏度高和穩(wěn)定性好的特點。
該制品可應(yīng)用于常規(guī) PCR 擴增和大規(guī)模基因檢測。該制品中已經(jīng)含有溴酚藍染料，PCR 擴增完畢后可直接點樣于瓊脂糖凝膠，無需再加入 DNA Loading Buffer。 該制品擴增得到的 PCR 產(chǎn)物的 3’端含有"A"尾巴，可直接連接入 pUC57 Simple TOPO克隆載體。
應(yīng)用：基因檢測、定點突變分析和 T-A 克隆。
儲存：長期儲存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 個月）保存。

使用方法
1. 按下表配制反應(yīng)體系并混合均勻：
2×Super Taq PCR Mix 25 μl
上游引物(10 μM) 2 μl
下游引物(10 μM) 2 μl

具體程序根據(jù)實際擴增情況而定。
3. 電泳：1% 瓊脂糖凝膠電泳，上樣 5 μl，電泳結(jié)束在紫外燈下檢測條帶。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標RNA的已知序列進行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。